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福建欧洲鳗鲡拟指环虫生物学特性研究和SSR-PCR分析

作　者: 黄翠琴
导　师: 王寿昆
学　校: 福建农林大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 欧洲鳗鲡虫卵成虫粘液鳗鲡拟指环虫短钩拟指环虫形态学 SSR-PCR
分类号: S941
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

鳗鲡拟指环虫病是鳗鲡人工养殖的重要寄生虫病，对鳗鲡养殖造成了巨大的经济损失，但病原问题尚不明确。为明确寄生于福建省内寄生于欧洲鳗鲡拟指环虫的种类及其病原生物学特点，我们对其形态特征、分类、幼虫发育、空间分布、DNA分子标记、多态性等生物学特性开展研究，为拟指环虫的防治提供生物学基础资料。本文共收集了福建罗源、福清、尤溪、建宁、龙岩、莆田、仙游等七个地区部分鳗场的欧鳗拟指环虫，先从形态上鉴别虫种，观察虫卵、幼虫及成虫的形态学特征、虫卵的发育、纤毛蚴虫生活史、寄生部位的分布等，并对成虫进行扫描电镜观察：通过对各地区拟指环虫成虫的形态特征的比较，我们确定，目前寄生于福建省欧洲鳗鲡的拟指环虫有两种，即鳗鲡拟指环虫(Pseudodactylogrus anguillae,Yin etSproston,1948)和短钩拟指环虫(Pseudodactylogrus bini,Kikuchi,1929)。其中罗源、龙岩、尤溪鳗场欧洲鳗鲡寄生的拟指环虫主要为短钩拟指环虫，建宁、莆田、仙游鳗场欧洲鳗鲡寄生的拟指环虫主要为鳗鲡拟指环虫；福清鳗场欧洲鳗鲡两种拟指环虫均有寄生。研究显示寄主粘液对P.bini虫卵的孵化起着重要的作用；通过研究鳗鲡拟指环虫和短钩拟指环虫在鳃上的分布，其中鳗鲡拟指环虫在欧鳗左右鳃的外侧第一片上分布密度最高，短钩拟指环虫在各鳃片上的数量无显著差异。八个地区的拟指环虫经SSR-PCR，聚丙烯酰胺电泳，溴化乙锭染色，紫外灯下观察，应用UPGMA统计分析软件绘制聚类图，结果显示，两种拟指环虫DNA共扩增出条带28条，平均条带数为7.34±2.6，分子量约在200-1030bp之间。短钩拟指环虫和鳗鲡拟指环虫的遗传相似系数在0.36-0.67之间，各地短钩拟指环虫和鳗鲡拟指环虫之间存在不同程度的遗传差异，这种差异与地理环境上的差异基本一致。形态上鉴定的各地拟指环虫种类(短钩拟指环虫或是鳗鲡拟指环虫)，在SSR-PCR多态性实验中得到很好的证实。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-8
1 前言  8-14
  1.1 种类及形态学特征  8-9
  1.2 分布与生态学研究  9-12
  1.3 分子生物学研究  12-13
  1.4 拟指环虫的防治  13-14
2 材料与方法  14-17
  2.1 福建省拟指环虫的生物学特性实验  14-15
    2.1.1 虫卵及成虫的收集  14-15
    2.1.2 观察虫卵及其孵出的纤毛蚴虫形态及寿命  15
    2.1.3 扫描电镜SEM制作成虫标本  15
    2.1.4 虫体测量  15
    2.1.5 计算欧洲鳗鲡鳃上寄生的拟指环虫成虫数  15
  2.2 福建欧洲鳗鲡拟指环虫的SSR-PCR分析实验  15-17
    2.2.1 基因组DNA的制备  15-16
    2.2.2 PCR反应体系的建立  16
    2.2.3 SSR-PER产物检测和分析  16-17
3 结果与分析  17-27
  3.1 福建省拟指环虫的生物学特性  17-21
    3.1.1 成虫形态观察  17
    3.1.2 虫卵的发育观察  17
    3.1.3 幼虫形态、活动性和寿命  17-21
    3.1.4 寄土粘液对P.bini虫卵孵化率的影响  21
    3.1.5 P.anguiLlae和P.bini寄生鳗鱼鳃瓣的分布特点  21
  3.2 福建欧洲鳗鲡拟指环虫的SSR-PCR分析  21-27
    3.2.1 PCR条件优化  21-24
    3.2.2 福建七个地区用于SSR-PCR的拟指环虫形态鉴别  24
    3.2.3 SSR-PCR扩增产物及其分析  24
    3.2.4 福建养殖欧洲鳗鲡的拟指环虫的SSR遗传差异  24-27
4 讨论  27-31
  4.1 虫卵的发育及幼虫形态活动和寿命观察讨论  27-28
  4.2 拟指环虫种类  28
  4.3 扫描电镜效果分析  28-29
  4.4 拟指环虫空间分布  29
  4.5 不同种拟指环虫混合感染现象的讨论  29
  4.6 成虫形态比较  29-30
  4.7 遗传多样性分析  30
  4.8 SSR-PCR的优点  30-31
5 小结  31-32
参考文献  32-41
附录一  41-43
附录二  43-44
附录三  44-46
致谢  46

福建欧洲鳗鲡拟指环虫生物学特性研究和SSR-PCR分析

内容摘要

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