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Resveratrol synthase基因转化草莓的研究

作　者: 张利义
导　师: 王有年；李晓燕；唐益雄；吴燕民
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 果树学
关键词: 离体再生 植物表达载体构建 RS基因 转基因草莓
分类号: S668.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 128次
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内容摘要


草莓是世界上广泛栽培的重要商品果树。由于植物的病原菌危害，草莓的产和 品质受到了极大的影响，而现代生物技术为提高草莓的抗性和改善草莓的品质开了 一条新的育种途径。Resveratrol既是一种对人体具保健功能的植物雌激素，又一 种能够增强植物抗逆境胁迫的重要的植保素。而多数重要的作物都不含RS基因，此 试验拟将RS基因导入草莓，以期获得高品质，抗病菌能力强的草莓新品种。 试验通过对影响草莓叶片再生诸多因子的研究，确立了以MS+B5为芽再生基培 养基，在45天培养周期内，每15天换一次培养基，其中逐次降低TDZ浓度和改加 激素的种类，培养基三次所加激素的浓度分别为：I TDZ 2．0 mg／L+IAA 0．1 mg／L，ⅡTDZ 1．5 mg／L+IBA 0．1 mg／L，Ⅲ TDZ 1．0 mg／L，获得了全明星和tudla叶片高效稳定的再生组培体系，再生率75％以上。在此基础上，构建了卡那霉素抗性的植物表达载体pC2PRS，并以冻融法导入EHAl05中获得了侵染工程菌，试验通过侵染时间，浸染不同类型的外植体以及不同筛选方式等方面对草莓的遗传转化系统进行了优化，确定了浸染时间为4—5分钟，延迟筛选2周，共培养时间以菌迹出现为准的实验程序。实验最终获得了2株在选择压下能够生根的抗性植株，经PCR检测表明2株均为阳性植株，初步证明外源Resveratrol synthase基因已导入草莓基因组中。

全文目录


目 录  6-9
1 引 言  9-18
  1.1 植物基因工程研究进展简论  9-11
  1.2 草莓转基因受体系统组织培养及遗传转化研究进展  11-15
    1.2.1 草莓转基因受体组织培养系统研究进展  11-14
    1.2.2 草莓遗传转化研究  14-15
  1.3 白藜芦醇基因的功能特性及其遗传转化研究进展  15-17
    1.3.1 白藜芦醇(trans-resveratrol)的来源、分布  15
    1.3.2 白藜芦醇化学结构  15
    1.3.3 白藜芦醇的生物合成途径  15-16
    1.3.4 白藜芦醇的生理功能  16
    1.3.5 Resveratrol synthase 的遗传转化的研究现状  16-17
  1.4 研究的内容和意义  17-18
2 材料与方法  18-28
  2.1 试验材料  18-20
    2.1.1 植物试材  18
    2.1.2 植物培养条件  18
    2.1.3 菌株与质粒  18
    2.1.4 培养基  18-20
  2.2 试验方法  20-28
    2.2.1 草莓离体再生部分试验方法  20-21
    2.2.2 植物表达载体的构建与工程菌EHA105的获得  21-25
    2.2.3 遗传转化系统的研究  25-27
    2.2.4 抗性植株的分子生物学检测  27-28
3 结果与分析  28-38
  3.1 草莓离体再生体系的研究  28-32
    3.1.1 叶片及叶柄的再生生长动态  28
    3.1.2 TDZ外源激素及其组合激素种类对草莓再生的影响  28-29
    3.1.3 基本培养基对再生的影响错误！未定义书签。  29-30
    3.1.4 不同草莓品种在同一激素组合条件下再生情况  30
    3.1.5 AgNO3 对植株再生率的影响  30-31
    3.1.6 光照强度和暗培养对再生的影响  31
    3.1.7 草莓组织培养苗生根和移栽  31
    3.1.8 叶片褐化与再生苗玻璃化的解决  31-32
  3.2 植物表达载体pC2PRS的构建过程  32-34
    3.2.1 回收目的片段  32
    3.2.2 连接  32-34
    3.2.3 重组质粒转化后的鉴定  34
  3.3 遗传转化体系初步研究结果  34-37
    3.3.1 kan选择压的确定  34-35
    3.3.2 抑制菌抗生素浓度对不定芽分化的影响及选用浓度的确定  35
    3.3.3 共培养时间的确定标准  35-36
    3.3.4 侵染的时间对转化频率的影响  36
    3.3.5 选择方法和选择时间对转化的影响  36-37
    3.3.6 不同外植体浸染结果比较  37
  3.4 转基因草莓抗性植株的获得及PCR鉴定  37-38
4 讨论  38-40
5 结论  40-41
附 录  41-45
参考文献  45-50
致 谢  50-53

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 果树园艺 > 多年生草本果类 > 草莓
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