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晶状体前囊的悬浮培养及后发性白内障防治药物的体外筛选

作　者: 孟繁剑
导　师: 李秋明
学　校: 郑州大学
专　业: 眼科
关键词: 后囊混浊晶状体上皮细胞悬浮培养苦参素双氯酚酸钠普拉洛芬
分类号: R776.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

白内障囊外摘除联合人工晶状体植入术，是近年来治疗的白内障的主要方法。但在术后2月至5年之内，28.4％的患者出现后囊混浊(posterior capsule opacification，PCO)，导致视力再度下降。而对于先天性白内障患者，由于其晶体上皮细胞增生能力旺盛，所以术后较老年性白内障患者更易出现后囊混浊。后囊混浊是由于术后位于晶状体前囊及赤道部的上皮细胞增殖，并迁移至无细胞的后囊所致。这些迁移来的细胞呈复层生长，并呈成纤维细胞样外观，相互牵引，且分泌大量的细胞外基质。当该增殖膜蔓延至视区，将导致视力严重下降，必要时需行晶状体后囊切开术，但该手术又会引起一些其它的眼内并发症。由于后囊混浊的高发率，使得一些学者提出对儿童性白内障患者在手术时行晶状体后囊切除术合并前玻璃体切除手术，及术后合并应用抑制晶状体上皮细胞增殖的药物。本文通过建立牛晶状体前囊膜悬浮培养的模型，观察晶状体上皮细胞增殖情况；在药物防治方面观察苦参素、双氯酚酸钠(diclofenac sodium)、普拉洛芬(pranoprofen)等对牛晶状体上皮细胞(bovine len epithelial cell,BLEC)增殖的影响。一、牛晶状体前囊的悬浮培养方法：应用塑料培养板(PMMA聚甲基丙烯酸甲酯)材料，切割成一同心圆，且外缘带有6～8个齿状突起的支架，消毒备用。在无菌条件下将分离的牛晶状体前囊用所设计的支架悬挂于无菌培养瓶中分别培养1～6w，在不同培养时间(3d，1w，2w，3w，4w，5w，6w)用倒置显微镜、Giemsa染色法观察细胞增郑州大学2003届硕士学位论文晶状体前囊的悬浮培养及后发性白内障防治药物的体外筛选殖情况，并记录拍照。各组观察均以新鲜离体囊片为对照。结果:新鲜离体前囊完全透明，仅见残留的皮质及LEC，无细胞增生。所有前囊经培养3d后均有细胞增殖，细胞体积增大。lw后，整个囊片呈云雾状混浊;可见囊片中央大量细胞增生，相互重叠。Zw后，整个囊片呈云雾状混浊外，在中央区还可见点、片状混浊;细胞增生明显，并可见岛状增生。3w后，和Zw比较雾状混浊减轻，点、片状混浊较多;细胞转变为类圆形。4w后，点、雾状混浊均较3w减轻，复层增生区细胞边缘卷曲，皱缩脱离;细胞体积变小，呈凋亡现象。sw后，囊片大部分恢复透明，仅有个别细胞残留。6w后细胞完全脱落，囊片透明。二、苦参素、双抓酚酸钠、普拉洛芬对BLEC增殖的影响: 方法:分离BLEC并作细胞培养。将传代的BLEC在24孔培养板培养12小时，然后加入不同浓度的苦参素、双氯酚酸钠、普拉洛芬作用24小时及48小时。采用Giemsa染色一比色法测细胞吸光值，并分别求得苦参素、双氯酚酸钠、普拉洛芬对BLEC的半数抑制浓度(IDS。)结果:苦参素、双氯酚酸钠、普拉洛芬对体外培养BLEC增殖有显著抑制作用，呈浓度依赖性及时间依赖性改变。苦参素、双氯酚酸钠、普拉洛芬对于BLEc的IDS。值分别为1 87.50、1 19.14和79.o4mg.L一l。三、小结 1.在晶状体前囊立体培养时，晶状体上皮细胞的增殖和凋亡现象明显，向纤维细胞分化现象不明显。 2.该培养模型可解释保留晶状体前囊白内障手术后的临床现象。 3.苦参素、双氯芬酸钠、普拉洛芬在体外可抑制BLEC的增殖，可能成为防治后囊混浊的药物。

晶状体前囊的悬浮培养及后发性白内障防治药物的体外筛选

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