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牛蒡根提取物防治肿瘤作用的初步评价

作　者: 赵秀梅
导　师: 胡人杰
学　校: 天津医科大学
专　业: 药理学
关键词: 牛蒡根提取肿瘤免疫减毒增效抗突变
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的：牛蒡(Arctium lappa L.)是菊科牛蒡属植物。其果实牛蒡子为我国的法定药物,其根则作为食品,由于具有潜在的“防癌作用”而在日本受到欢迎。上个世纪60年代,日本学者曾经在牛蒡根中提取获得了多炔类化合物,而近来的研究表明多炔类化合物很可能具有抗肿瘤的生物活性。本试验研究的目的在于探求牛蒡根中是否具有防治肿瘤的活性成分,为进一步深入研究开发牛蒡根打下基础。方法：①牛蒡根的生药学鉴定采用常规感官法及显微鉴别法。化学成分鉴别采用薄层色谱法,以氯仿-甲醇-水(40：8：1)为展开剂,置紫外灯(254nm)下检视。试验用样品制备采用液-液分配萃取法。牛蒡根切片,室温阴干,以95%乙醇提取,回收溶剂。醇浸膏水混悬后,依次以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,连同萃取后的水层(及混悬物)分别回收溶剂,得到相应不同极性的五部分样品。②样品抗肿瘤活性评价采用MTT法体外肿瘤细胞(小鼠肿瘤HepA和S180)增殖抑制试验,评价指标为样品的IC50；③样品免疫活性评价采用体外Con A诱导的淋巴细胞增殖试验,评价指标为对淋巴细胞增殖的促进(或抑制)率；④样品减毒活性评价采用体外肿瘤化疗药物阿霉素、顺铂杀伤骨髓细胞的体外试验模型,观察样品对杀伤骨髓细胞的保护作用；⑤样品化疗增效作用的评价以体外肿瘤细胞增殖抑制试验为基础,观察合用样品后对化疗药物阿霉素IC50的影响；⑥防癌作用的评价采用Ames试验,选择TA 98测试菌株,选择化疗药物阿霉素为阳性诱变剂,以阿霉素产生诱变作用并在此基础上观察样品有无抗诱变活性。结果：①牛蒡根鲜品为肉质根圆柱型,皮黑褐色,有皱纹。肉质灰白色,味微苦而性粘。鲜品的含水量约为83.60%。显微镜下细部特征为木栓层为数列细胞,皮层较宽,韧皮部呈长三角形,韧皮射线宽广；形成层明显；木质部导管较多,呈放射状排列,无髓；中心附近裂隙多见。化学成分分析表明牛蒡根中不含牛蒡子中特有抗癌活性成分牛蒡苷。石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇及水层提取物的收率分别为0.20%、0.18%、0.40%、4.08%、13.55%。②牛蒡根各部分提取物对小鼠Hep A、S180肿瘤细胞均有不同程度的细胞毒作用,在一定浓度范围内基本上保持明确的量效关系。牛蒡根石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水提取物对肝癌Hep A细胞的IC50分别为25.97、30.62、40.67、81.80、988.81μg／mL。对小鼠S180细胞的IC50分别为9.42、13.30、50.71、32.18、2395.80μg／mL。其中石油醚、氯仿、提取物显示出较强的细胞毒作用,水提取物的细胞毒作用很低。③牛蒡根各部分提取物对Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞(主要是T淋巴细胞)的增值表现出了明确的抑制作用,其对淋巴细胞增殖的抑制作用基本上呈剂量依赖性。牛蒡根石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水提取物对淋巴细胞增殖抑制的IC50分别为26.67、28.68、27.26、156.88、629.23μg／mL。④牛蒡根正丁醇提取物与水提取物均可对阿霉素所致小鼠骨髓细胞的损伤具有一定的保护作用,其中正丁醇提取物的作用稍优于水提取物,正丁醇提取物浓度为10、40μg／mL时可明确对抗阿霉素对骨髓细胞的杀伤作用,提高骨髓细胞的存活率细胞存活率由41.71%提高到45.07%、49.40%(P<0.05)。样品浓度为2.5μg／mL可明确降低顺铂所致骨髓细胞毒作用。细胞存活率有61.78%提高到66.59%(P<0.05)。牛蒡根水提取物对顺铂所致骨髓细胞损伤的保护作用较弱,仅在低剂量(2.5μg／mL)时表现出一定的保护作用。⑤牛蒡根石油醚提取物(3μg／mL)、氯仿提取物(3μg／mL)同阿霉素合用后,阿霉素对小鼠Hep A肿瘤细胞的IC50分别为3.76、3.11μg／mL与单用阿霉素IC50(4.69μg／mL)相比有所降低,但无统计学意义。而乙酸乙酯提取物(5μg／mL)同阿霉素合用后,阿霉素对小鼠Hep A肿瘤细胞毒的IC50提高到5.39μg／mL,亦无统计学意义。⑥牛蒡根正丁醇提取物及水提物,其测试浓度为0.1、1.0、10.0μg／皿时,均能减低阿霉素对TA 98菌株的诱变作用,其诱变抑制率分别为31.15、65.41、69.78%和34.43、60.93、67.25%,表现出一定的量效关系。其中正丁醇提取物的中、高剂量组及水提物的中、高剂量组与阿霉素组相比,差异有显著性(P<0.05),显示出它们对阿霉素的诱变有中度抑制作用。结论：牛蒡根和牛蒡子的化学成分存在差异,前者不含有已知具有抗肿瘤活性的化学物质牛蒡苷。牛蒡根中具有抗肿瘤的活性成分,具有能够对抗化疗药物阿霉素和顺铂骨髓细胞毒活性的成分,另外牛蒡根中还含有具有抗诱变作用的成分。牛蒡根作为防治肿瘤的药物或食品具有开发研究的价值。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-12
前言  12-14
牛蒡根活性组分提取流程  14-15
实验一牛蒡根生药学鉴定及提取物的制备  15-20
  材料与方法  15-19
  结果  19-20
实验二牛蒡根提取物对肿瘤细胞增殖的影响  20-25
  材料与方法  20-24
  结果  24-25
实验三牛蒡根提取物对小鼠脾脏免疫细胞增殖的影响  25-29
  材料与方法  25-28
  结果  28-29
实验四牛蒡根提取物对阿霉素、顺铂所致小鼠骨髓细胞损伤的保护作用  29-32
  材料与方法  29-31
  结果  31-32
实验五牛蒡根提取物对阿霉素肿瘤细胞毒的增效作用  32-35
  材料与方法  32-34
  结果  34-35
实验六牛蒡根提取物的抗诱变作用  35-55
  材料与方法  35-39
  结果  39-55
讨论  55-65
展望  65-67
结论  67-68
参考文献  68-74
致谢  74

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