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热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480的杀伤作用

作　者: 李金茂
导　师: 马庆久；赖大年
学　校: 中国人民解放军第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: 基因疗法 5-氟胞嘧啶胞嘧啶脱氨基酶基因热化疗癌胚抗原 SW480
分类号: R735.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

目的探讨温热疗法能否增加前药5-FC对转CD基因结肠癌细胞的靶向性杀伤作用及作用机制。方法脂质体法将含CD基因的逆转录病毒载体GlCEACDNa直接转染大肠癌SW480细胞，PCR分析目的基因整合，RT-PCR方法检测目的基因表达；将转染GlCEACDNa之SW480细胞及未转基因之SW480细胞接种到96孔细胞培养板中，接种同时加入含各种梯度浓度的前药5-FC，热疗组分别于加入5-FC的同时在43℃下热疗30min，对照组不热疗，第8 d去除培养液，以MTT法测定活细胞比率并计算杀伤率，分析前药热疗对转基因肿瘤细胞的杀伤作用。此外，分别于加入5-FC的同时在41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、60’C下热疗30min，以及在加入5-FC的同时在43℃下热疗10min、20min、30min、40min、50min、1h，以探讨前药5-FC的最适温度与时间。流式细胞术分析热化疗对肿瘤细胞周期的影响，透射电镜观测热化疗前后肿瘤细胞结构的改变。结果脂质体法成功将GlCEACDNa转染入大肠癌SW480细胞，PCR检测表明目的基因整合到靶细胞中，RT-PCR检测表明热疗对目的基因在肿瘤细胞的表达无明显影响；未转基因热疗组与对照组相比，细胞存活率明显降低po0刀1，t一6．994，n ＝9），转CD基因之 SW480细胞对 5FC的敏感性明显提高卜0．01，t一．4983 n一卜转基因热疗组与转基因对照组比较，5FC对细胞的杀伤率明显增加po0刀5，t d．403，n叫卜在各组中，以转基因热疗组杀细胞作用最强。细胞的杀伤率与转基因细胞的比例并不一致，当转基因细胞达到 30％时，对混合细胞的杀伤率为 53．l％，与 100％转基因细胞的杀伤率（59．5％）相似；在热疗组，当转基因细胞达到30％时，对混合细胞的杀伤率为55．5％，当转基因细胞达到50％时，对混合细胞的杀伤率为79．5％，与100％转基因细胞的杀伤率（83．2％）相似。转基因细胞在 5FC 43oC热化疗 30 min，基本达到最佳杀细胞效果卜0刀5，trw＝2．260，n—9：P＜0＊5，t删一2二 79，n ＝9），再增加温度及作用时间，对肿瘤细胞的杀伤作用未见明显增大。流式细胞术检测结果显示前药治疗组与热化疗组 S期细胞比例明显增多沪功．005，t习．4189 n ＝6； P＜0．001，t刁．158，n畸），提示热化疗使肿瘤细胞产生 S期阻滞；透视电镜检测细胞结构的改变，热化疗组可见细胞表现为细胞膜微绒毛消失，边缘变平直，细胞核皱缩，染色质聚集在核模下。结论 1 前药5一FC热化疗，能明显提高转CD基因大肠癌细胞SW480对前药的敏感性； 2 本实验提示，前药5—FC在43oC下热疗30 min，基本达到最大的杀细胞效果； 3 本实验提示，热化疗使SW480细胞产生S期阻滞，从而促进细胞凋亡。

全文目录

英文缩写词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-12
文献回顾  12-29
第一部分材料与方法  29-40
  一材料  30-32
  二实验方法  32-40
    (一) 结肠癌SW480细胞转基因实验  32-34
    (二) 前药5-FC热化疗实验  34-36
    (三) 前药热疗对肿瘤细胞作用机理探讨实验  36-37
    (四) 验证实验  37-40
第二部分结果  40-54
讨论  54-57
小结  57-58
致谢  58-59
参考文献  59-67
附录  67

热化疗对转CD基因结肠癌细胞SW480的杀伤作用

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