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石榴品种（系）选育和再生体系建立及RAPD条件优选

作　者: 张水明
导　师: 朱立武
学　校: 安徽农业大学
专　业: 果树学
关键词: 石榴选育再生体系 RAPD
分类号: S665
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

本文从石榴种质资源的调查、品种的选育、安徽省各主栽品种的经济性状分析、离体再生体系的建立、基因组DNA的提取以及RAPD反应条件优选等方面对石榴进行了系统的研究，结果如下：通过对安徽省石榴种质资源的实地调查和田间栽培育种试验，筛选出三白石榴大果大子粒变异新品系“皖榴1号”；玛瑙籽大子粒着色新品系“皖榴2号”和玉石籽大子粒着色新品系“皖榴3号”。几年来的试验研究结果表明，变异母株及其无性系后代的遗传性状表现稳定，综合经济性状优异。根据模糊数学基本原理，测定了安徽省主栽的23个石榴品种类型的产量、品质、成熟期、耐贮性、抗逆性等15个经济性状，对分析的品种经济性状表现优劣进行了综合评判，结果表明，皖榴三号、皖榴二号、玛瑙籽综合经济性状比较好；淮北软籽五号、中厚皮玉石籽、皖榴一号、厚皮玉石籽、大笨子、二笨子、火葫芦二号、三白石榴次之；薄皮糙、薄皮玉石籽、青粉皮一号、大果粉皮、淮北大青皮、美人蕉、黄里石榴、红粉皮二号、青皮糙一般；火葫芦、红粉皮三号、红粉皮一号较差。根据评判结果，笔者认为：安徽省发展石榴生产，早熟品种应以皖榴二号和玉石籽系列为主，其成熟期在9月15日左右，能满足中秋、国庆两节的市场需求，且综合经济性状较好；中熟品种以皖榴三号、玛瑙籽和皖榴一号为主，其中皖榴一号百粒籽重较为突出，平均达84.4g，大者超过100g，但由于其不耐贮藏，可适度发展；晚熟品种则以大笨子、二笨子为主；粉皮系列可逐步淘汰。各地应结合自身情况及市场行情合理搭配各类型品种。通过对石榴休眠枝、成熟叶片及当年生新梢离体培养研究，建立了石榴组织器官离体培养再生体系。试验表明，休眠枝茎段培养，以MS为基本培养基，附加2.0mg／L BA+1.0mg／L GA，接种培养20天后，愈伤组织形成，继续培养15天后，愈伤组织上分化出不定芽；以成熟叶片为外植体，在MS中附加5mg／L BA+0.1mg／L NAA，培养25天后形成愈伤组织，继续培养20天后，愈伤组织上分化出不定芽；当年生新梢茎段培养，以MS+2.0mg／L BA+0.3mg／L NAA对茎段腋芽的增殖最适宜，平均每35d可增殖4.9倍；石榴试管芽苗诱导生根，用1／2MS为基本培养基，附加0．5mg／L NAA+0.1mg／L AC+20g／L蔗糖，接种10天后，生根率达95.8％，平均生根数为5.6条。另外，在培养基中附加0.1％AC，对吸附酚类物质、防止外植体褐变、促进生札均有显著秃粟。以石榴不同品系的成熟叶片和幼叶为材杠，采用SDS法提取基因组DNA，比较了不同材料的提取效果，并以此为模板进行RAPD R应，优化”RAPD反应条件。试验表明，用幼叶能提取高质量的基因组DNA，A260／A280＝1．88，可亘接用于RAPD分析，而成熟叶片由于酚类、丹宁、色素和多糖等物质的含量较高，对Taq酶的活性起抑制作用。这些次生物质在植物生长的不同时期含量不同，一般幼嫩的组织器官含量较少，而成熟或老化的组织器宫含量较多，所以用成熟叶片虽能提取到基因组DNA，但不能直接用于RAPD分析。优化的 RAPD反应体系为：反应体积 SC ul，包含 8川g左右模板 DNA、5 ul市售10 X PCR Buffer、2．ommol／L MgCI；、120 u m。1／L dNTPs、3U的 Taq酶、0．5卜。。1几随机引物；热循环程序为94C预变性smiD。便模板DNA充分变性，然后进入下列温度循环，94℃变性30see，36℃退火45 see，72OC延伸lmin30 see，循环数40，最后72oC延伸7m1n。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
离体培养与RAPD技术在果树育种上的应用  8-20
引言  20-21
材料与方法  21-25
  1 材料  21
  2 试剂和仪器  21
  3 试验方法  21-25
    3.1 石榴种质资源调查  21
    3.2 石榴经济性状指标测定  21-22
    3.3 石榴离体器官再生体系的建立  22-23
    3.4 石榴基因组DNA的提取及RAPD反应条件优选  23-25
结果与分析  25-34
  1 安徽省石榴种质资源  25-26
  2 安徽石榴品种资源经济性状模糊综合评判  26-28
    2.1 各级评判结果  26-27
    2.2 评判等级的划分  27-28
  3 石榴离体器官再生体系的建立  28-30
    3.1 不同BA、NAA、AC浓度对新梢茎段腋芽增殖的影响  28-30
    3.2 不定根的诱导  30
    3.3 石榴离体培养再生体系  30
  4 石榴RAPD反应条件优选  30-34
    4.1 不同组织器官提取基因组DNA的产量和质量  30-32
    4.2 RAPD分析条件优化  32-34
讨论  34-37
  1 关于评判因素权重的确定  34
  2 关于安徽省发展石榴的主栽品种  34
  3 石榴离体培养中AC的作用  34-35
  4 关于石榴离体培养再生体系  35
  5 关于RAPD分析优化条件  35-37
结论  37-39
参考文献  39-45
附录  45-54
致谢  54-55
作者简介  55-56
在读期间发表的学术论文目录  56

石榴品种（系）选育和再生体系建立及RAPD条件优选

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