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晚期糖化终产物通过p38MAPK、JNK、NF-κB途径促进T淋巴细胞分泌TNF-a

作　者: 彭伟
导　师: 游捷
学　校: 福建医科大学
专　业: 内科学
关键词: 晚期糖化终产物 Jurkat细胞 炎症因子 信号转导
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的:研究表明晚期糖化终产物(AGEs)与糖尿病加速动脉粥样硬化(AS)形成有密切关系。研究发现AGEs可影响内皮细胞、单核巨噬细胞、平滑肌细胞表达炎症因子,使细胞功能紊乱,参与AS的形成。而AGEs对T细胞功能影响的研究较少,T细胞的激活与炎症因子的表达在AS的形成中起重要作用,本实验研究AGEs对人类T细胞白血病细胞株Jurkat细胞(CD4+T细胞)表达炎症因子TNF-а的影响及其信号机制,进一步了解糖尿病动脉粥样硬化形成的机制。方法:①常规方法制备AGEs,不同浓度AGEs与牛血清白蛋白(BSA)作用于PHA(0.25μg/ml)预刺激48h后的Jurkat细胞24h,MTT法检测AGEs对细胞生长的影响;②不同浓度AGEs与BSA作用于PHA(0.25μg/ml)预刺激48h后的Jurkat细胞24h,ELISA法检测AGEs与BSA对Jurkat细胞分泌炎症因子TNF-а的影响;③适当浓度的AGEs(200μg/ml)作用于PHA(0.25μg/ml)预刺激48h后的Jurkat细胞0、10、20、30、40min,Western-blot检测AGEs对p38、JNK、Akt磷酸化及非磷酸化水平的影响。④Western-blot检测信号通路阻滞剂及N-乙酰- L -半胱氨酸(NAC)对IκB磷酸化与非磷酸化水平的改变情况。⑤ELISA方法观察信号通路阻滞剂及NAC对AGEs刺激Jurkat细胞分泌TNF-а的影响。结果:①不同浓度AGEs与BSA作用于PHA预处理的Jurkat细胞24h后,MTT法检测结果显示各浓度AGEs与BSA对Jurkat细胞生长均无明显影响(p>0.05)。②不同浓度AGEs与BSA作用于PHA预处理的Jurkat细胞24h后,ELISA法检测结果显示AGEs(100～400μg/ml)可促进Jurkat细胞上调炎症因子TNF-а表达(p<0.01)。③200μg/ml的AGEs作用于预处理的Jurkat细胞0～40min后,Western-blot结果显示AGEs可上调p-p38、p-JNK表达,20～30min时作用明显,对p-Akt无明显影响。④200μg/ml的AGEs作用于预处理的Jurkat细胞30min可明显上调p-IκB表达,p38、JNK抑制剂和NAC能明显抑制AGEs上调p-IκB。⑤p38、JNK抑制剂和NAC能明显抑制AGEs上调炎症因子TNF-а。结论: AGEs可促进PHA预处理的Jurkat细胞分泌炎症因子TNF-a,其机制与激活p38、JNK,上调p-IκB有关,与PI3K/Akt途径无关;NAC能够明显抑制AGEs引起的p-IκB及TNF-а上调,表明氧化应激也是其重要途径之一。

全文目录


英文缩略词  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一部分 AGEs 对 Jurkat 细胞分泌 TNF-а 的影响  11-20
  材料与方法  11-15
  结果  15-17
  讨论  17-19
  小结  19-20
第二部分 AGEs 通过 p38、JNK、NF-κB 途径促进 Jurkat 细胞分泌 TNF-а  20-33
  材料与方法  20-25
  结果  25-29
  讨论  29-33
结论  33-34
参考文献  34-40
致谢  40-41
综述  41-48

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病
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