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CIP-4的剪接突变现象在肾小管上皮细胞转分化中的作用初探

作　者: 周欢
导　师: 徐钢
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: CIP-4 剪接突变重叠延伸PCR
分类号: R692
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 7次
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内容摘要

目的观察TGF-β和低氧两种方式诱导下的人近端肾小管上皮细胞(HKC)转分化(EMT)过程中CIP-4(Cdc42-interacting protein-4)是否会发生剪接突变现象而产生CIP-4的剪接突变体CIP-4V。初步探讨其对于EMT可能产生的机制和意义。并且通过重叠延伸PCR人工合成突变体CIP-4V,构建其真核表达的质粒pEGFP-C1-CIP-4V。方法通过TGF-β和低氧两种方式刺激下培养HKC细胞,通过RT-PCR采用梯度凝胶电泳的检测方法观察其核酸水平CIP-4剪接突变现象的发生,通过Western blot的方法在蛋白质分子水平检测CIP-4剪接突变现象的发生。通过重叠延伸PCR人工合成突变体CIP-4V,构建其真核表达的质粒。结果两种不同的诱导方法,剪接突变现象不同,通过缺氧诱导的HKC细胞检测到了CIP-4的剪接突变体CIP-4V,而通过TGF-β未检测到剪接突变现象。人工合成突变体CIP-4V经测序验证成功,并转入真核表达质粒pEGFP-C1中。结论CIP-4的剪接突变现象除了在肾脏恶性肿瘤中发生外,在HKC细胞缺氧诱导下也可以发生,为研究EMT提供了新思路,但为何TGF-β和低氧两种方式刺激下培养HKC细胞发生的剪接突变现象不一致,具体机制还有待于进一步研究。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
第一部分  9-32
  前言  9-11
  材料与方法  11-20
  结果  20-22
  附图  22-29
  讨论  29-32
第二部分  32-47
  前言  32-33
  材料与方法  33-40
  结果  40-41
  附图  41-45
  讨论  45-47
参考文献  47-50
致谢  50

CIP-4的剪接突变现象在肾小管上皮细胞转分化中的作用初探

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