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计算机辅助分析两栖类角膜诱导中胶原免疫组化研究

作　者: 刘怀金
导　师: 罗玉柱；王子仁
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原 免疫组织化学 免疫细胞化学 角膜诱导 角膜发育 花背蟾蜍 计算机辅助图像分析
分类号: Q954.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


本文以花背蟾蜍(Bufo raddei Strauch)后肢芽期蝌蚪为实验材料,通过免疫组织化学SP法检测了花背蟾蜍蝌蚪变态期角膜发育和角膜诱导过程中Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原在角膜各部分分布及变化情况,并应用计算机辅助图像分析系统对Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原进行光密度分析。同时还用透射电镜观察了Ⅰ型胶原在角膜诱导过程中的变化。结果发现: (1)在角膜正常发育组中,Ⅰ型胶原在完全变态期角膜基质中有较高的表达,而Ⅲ型胶原除在上皮层有较强表达外,在基质层与内皮层也均有表达,Ⅳ型胶原在前肢芽期Bowman′s膜中有较强表达,也在Descement′s膜、上皮下基底膜、角膜基质中均有表达,只是较Ⅰ型胶原在完全变态期角膜基质中的表达弱;(2)在角膜移植组中,Ⅰ型胶原在角膜移植后30d,Ⅲ型胶原在22d表达较高,上皮下胶原纤维排列较整齐,移植片开始透明;到了移植后40d,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达达到最大值。此时,角膜已基本透明;而Ⅳ型胶原在整个透明过程中的表达趋于稳定,只是在移植后46d略高一些。对Ⅰ型胶原免疫细胞化学研究表明,在移植后16d,上皮中黑色素颗粒较多,与阴性对照相比,免疫反应较弱;移植后30d,免疫反应较强;而到了移植后40d,移植片中黑色素减少,角膜基本透明,与阴性对照相比,免疫反应很强,这与免疫组织化学染色结果相一致。因此,根据Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原在角膜发育和角膜诱导过程中的表达变化以及胶原在角膜发育和角膜诱导的形态学变化过程中所起作用的有关报道,我们推测: (1)在角膜正常发育组中,随着胶原等细胞外基质的增多,内、外角膜开始愈合,增多的胶原中,主要为Ⅰ型胶原,它是构成角膜基质的主要成分。Ⅲ型胶原除在上皮表达外,与Ⅰ型胶原同时存在,只是表达比例不同。Ⅳ型胶原是基底膜的主要成分,同时在角膜基质中也有表达,角膜基质的构建可能部分取决于不同类型胶原蛋白表达比例。(2)角膜移植组,随着表皮移植片的透明,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达逐渐增加,到基本透明时,Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达达到最大值,Ⅰ、Ⅲ型胶原可能在表皮移植片透明为角膜过程起一定作用。而Ⅳ型胶原在表皮移植

全文目录


摘要  4-6
SUMMARY  6-8
第一部分 文献综述  8-33
  1. 胶原蛋白的研究现状及意义  9-17
    1.1 胶原蛋白的化学结构  10-12
    1.2 胶原蛋白的氨基酸结构特征  12
    1.3 胶原蛋白的分类  12-13
    1.4 胶原蛋白产生过程中涉及的细胞类型  13
    1.5 胶原蛋白的免疫学检测  13-15
    1.6 胶原蛋白的生物学作用  15-17
  2. 角膜的一般结构  17-20
    2.1 角膜的解剖学  17-18
    2.2 角膜的组织学  18-20
  3. 角膜形成的特点  20-21
  4. 角膜诱导  21-22
  5. 胶原在角膜诱导及角膜发育过程中的研究进展  22-26
  6. 计算机辅助病理图像分析技术  26-31
    6.1 概述  26
    6.2 计算机辅助图像分析系统  26-27
    6.3 计算机辅助病理图像分析系统的工作原理  27-29
    6.4 计算机辅助病理图像分析中影响测量误差的因素  29-30
    6.5 图像分析中的测量误差控制  30-31
    6.6 计算机辅助病理图像分析中应该注意的问题  31
  7. 本文的研究内容及目的  31-33
第二部分 材料与方法  33-40
  1. 试剂与材料  33-34
    1.1 试剂  33
    1.2 材料  33-34
  2. 方法  34-40
    2.1 角膜移植组  34
    2.2 角膜正常发育组  34
    2.3 光镜免疫组织化学及HE 染色  34-35
    2.4 电镜免疫细胞化学染色  35-36
    2.5 光密度分析  36-40
第三部分 实验结果  40-54
  1. 组织学实验结果  40-44
    1.1 角膜正常发育组的组织学染色  40-42
    1.2 角膜移植组的组织学实验结果  42-44
  2. Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原的免疫组织化学染色结果  44-54
    2.1 角膜正常发育组  44-50
    2.2 角膜移植组  50-54
第四部分 讨论  54-60
  1. 本实验的方法学讨论  54-55
  2. 花背蟾蜍蝌蚪变态期内、外角膜愈合的原因  55-56
  3. 角膜发育过程中Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原的表达  56-57
  4. 角膜诱导与几种胶原的可能关系  57-60
第五部分 结论  60-61
需要进一步讨论的问题  61-62
参考文献  62-68
图版Ⅰ  68-69
图版Ⅱ  69-70
图版Ⅲ  70-71
图版Ⅳ  71-72
图版Ⅴ  72-74
图版Ⅶ  74-75
图版说明  75-78
硕士在读期间发表的文章  78-79
致谢  79-80
个人简历  80-81
导师简介  81-83

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中图分类: > 生物科学 > 动物学 > 动物形态学 > 动物组织学（比较组织学）
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