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花生粕抗氧化肽的研究

作　者: 柳杰
导　师: 张晖
学　校: 江南大学
专　业: 食品科学
关键词: 花生粕抗氧化肽超滤脱盐凝胶过滤色谱反向高效液相色谱
分类号: TS229
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

花生粕是花生仁经压榨提炼油料后的副产品,目前主要应用在饲料中,有时甚至作为废料扔掉。抗氧化肽作为一种天然抗氧化剂,具有较好的抗氧化性和安全性,吸引了越来越多的关注。因此,充分利用花生粕制备抗氧化肽是重要的研究课题,具有较高的应用价值。本文以花生粕为原料,利用筛选得到的枯草芽孢杆菌20029对花生粕进行发酵处理,得到了花生粕发酵液,通过响应面分析优化得到了制备抗氧化肽的最佳条件:pH值8、温度30℃、发酵时间49.5h,在此条件下,发酵液的DPPH自由基(DPPH?)清除率为63.28%。并对不同发酵时间的DPPH?清除率与多肽含量的相关性进行了研究,发现DPPH?清除率与多肽含量的相关性较好,P值为0.0010。利用超滤对花生粕发酵液进行了粗分离,分离效果较好,超滤后,发酵液的抗氧化性变化不大。采用DA201-C大孔吸附树脂对多肽进行了精制处理,发现吸附过程属于快速平衡吸附,动态吸附过程中,上样浓度、流速均对吸附的穿透点产生影响,热动力学研究发现,树脂对多肽的吸附符合Langmuir方程式,拟合相关系数均在0.98以上,利用25%～100%的乙醇对吸附后的树脂进行了洗脱,发现不同洗脱组分的氨基酸组成、分子量有较大差异,对不同组分的抗氧化活性进行了测定,发现75%乙醇洗脱组分(PMFH-75)的活性最强。利用凝胶过滤、半制备RP-HPLC对PMFH-75进行了分离纯化,PMFH-75经凝胶过滤分为4个组分,其中F3的DPPH?清除率显著高于其他三个组分,并利用LC-MS对F3中的抗氧化多肽的组成和结构进行了分析。最后对发酵后的残渣的成分进行了分析,在氨基酸组成方面,同花生粕原料进行了比较,发现残渣中的Arg的含量降低,Met的含量增加,蛋白质的营养价值得到一定程度上的提高。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-7
1 引言  7-11
  1.1 多肽的介绍  7
  1.2 多肽的抗氧化作用  7-8
  1.3 抗氧化肽的制备  8
  1.4 花生粕的介绍  8-9
  1.5 花生粕的研究及利用现状  9
  1.6 本课题研究的意义和主要内容  9-11
2 实验材料及方法  11-17
  2.1 实验材料和仪器  11
    2.1.1 实验材料  11
    2.1.2 仪器与设备  11
  2.2 实验方法  11-17
    2.2.1 菌株的活化  11-12
    2.2.2 摇瓶筛选发酵菌株  12
    2.2.3 酶活及水解度(DH)的测定  12
    2.2.4 双缩脲测定酸溶性多肽含量  12
    2.2.5 抗氧化活性的测定  12
    2.2.6 发酵实验的优化  12
    2.2.7 不同发酵时间的DPPH?清除率与多肽含量的相关性分析  12
    2.2.8 花生粕发酵液的超滤处理  12-13
    2.2.9 大孔树脂的静态吸附和解吸实验  13
    2.2.10 大孔树脂的动态吸附实验  13-14
    2.2.11 大孔树脂对花生粕静态吸附的热动力学  14
    2.2.12 氨基酸分析  14
    2.2.13 多肽分子量分布的测定  14
    2.2.14 蛋白质或多肽疏水值的计算  14-15
    2.2.15 抗氧化肽的分离纯化  15-16
    2.2.16 成分分析  16-17
3 实验结果及讨论  17-42
  3.1 花生粕的成分  17
  3.2 菌株的筛选  17-19
    3.2.1 水解度(DH)的测定  17-18
    3.2.2 双缩脲测定酸溶性多肽含量  18
    3.2.3 酶活的测定  18-19
    3.2.4 6 株枯草芽孢杆菌发酵液抗氧化活力的测定  19
  3.3 发酵制备抗氧化肽的优化实验  19-24
    3.3.1 时间单因素实验  19-20
    3.3.2 接种量单因素实验  20
    3.3.3 pH 值单因素实验  20-21
    3.3.4 温度单因素实验  21
    3.3.5 响应面优化设计  21-23
    3.3.6 不同发酵时间的DPPH?清除率与多肽含量的相关性分析  23-24
  3.4 发酵液的超滤及分级产物抗氧化活性分析  24-27
    3.4.1 超滤前后多肽的分子量  24-26
    3.4.2 超滤对发酵液抗氧化活性的影响  26-27
  3.5 大孔树脂的脱盐和分级洗脱  27-37
    3.5.1 大孔树脂的静态吸附与解吸实验  27-29
    3.5.2 大孔树脂对花生粕多肽静态吸附的热动力学  29-30
    3.5.3 大孔树脂的动态吸附和解吸实验  30-32
    3.5.4 乙醇分级洗脱物的脱盐效果  32-33
    3.5.5 多肽分级组分的抗氧化活性  33-35
    3.5.6 多肽分级组分分子量的测定  35-36
    3.5.7 多肽分级组分的氨基酸分析  36-37
  3.6 花生粕抗氧化肽的分离纯化与结构分析  37-40
    3.6.1 凝胶色谱SephadexG-15 分离PMFH-75  37-38
    3.6.2 RP-HPLC 分离组分F3  38
    3.6.3 LC-MS 对花生粕抗氧化肽F3 的分析  38-40
  3.7 发酵后残渣的成分分析  40-42
结论与展望  42-43
致谢  43-44
参考文献  44-49
附录  49

花生粕抗氧化肽的研究

内容摘要

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