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酵母基因组中钙离子平衡相关基因的初步研究

作　者: 王书丹
导　师: 蒋伶活
学　校: 天津大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 钙离子酿酒酵母文库筛选钙离子含量
分类号: Q75
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 22次
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内容摘要

在真核细胞中,钙离子作为胞内信使来调节许多生物过程,例如细胞增殖、肌肉收缩、细胞程序性死亡。细胞通过维持细胞质和细胞器内最适钙离子浓度,来调节钙离子的平衡系统,使其成为高度调节的代谢途径。酿酒酵母细胞中,已经阐明了许多钙离子平衡调节机制,但还有许多未知的机制需要去探索,所以我们通过高通量的筛选来研究钙离子平衡调节机制。详细的了解钙离子调节机制,有助于促成新的、更有效的药物来治疗真菌感染、自身免疫病和神经变性疾病。本文通过对酿酒酵母双倍体单基因缺失株文库进行钙离子敏感性筛选,筛选出37个对0.4MCaCl——2敏感的缺失株。进一步对其敏感程度进行划分,划分结果显示有12株非常敏感,有10株一般敏感。然后对这些菌株缺失的基因功能进行分类,发现有26%的基因是液泡分选基因,14%的基因与磷酸盐途径有关,14%的基因与高渗胁迫应答有关,11%的基因与液泡V-ATP酶有关。分析基因功能定位发现,30%的基因在细胞质中发挥功能,15%的基因在液泡中发挥功能,12%的基因在细胞核中发挥功能,9%的基因在内质网中发挥功能。最后测量这些敏感菌株的胞内钙离子含量,发现9个基因缺失株胞内钙离子含量高于野生型1.5倍以上。

全文目录

中文摘要  3-4
ABSTRACT  4-7
第一章文献综述  7-21
  1.1 酵母和酿酒酵母  7-10
    1.1.1 酿酒酵母基因组结构  7-8
    1.1.2 酿酒酵母作为模式生物  8-9
    1.1.3 酿酒酵母基因缺失株文库  9-10
  1.2 钙离子平衡调控  10-20
    1.2.1 钙离子平衡调控机理  10-11
    1.2.2 钙调磷酸酯酶  11-13
    1.2.3 RCANs：钙调磷酸酯酶调控因子  13-15
    1.2.4 钙调磷酸酯酶的调控因子HSPs  15-18
    1.2.5 钙调磷酸酯酶调控与真菌发病机制  18-20
  1.3 本论文研究的内容和意义  20-21
第二章实验材料与方法  21-31
  2.1 实验材料  21-24
    2.1.1 实验菌株与缺失株文库  21-23
    2.1.2 实验所用试剂药品  23
    2.1.3 实验仪器  23-24
  2.2 实验溶液及培养基的配制  24-25
    2.2.1 溶液配制  24
    2.2.2 培养基  24-25
  2.3 电子资源  25-27
    2.3.1 SGD(Saccharomyces Genome Database)  25-26
    2.3.2 MIPS（Munich Information center for Protein Sequences）  26-27
  2.4 实验方案  27-31
    2.4.1 实验原理  27
    2.4.2 文库菌株的保存  27-28
    2.4.3 初步筛选  28
    2.4.4 后期验证  28-29
    2.4.5 功能总结  29
    2.4.6 胞内钙离子含量测定  29-31
第三章实验结果  31-47
  3.1 钙离子敏感菌株的筛选  31-39
    3.1.1 初期筛选结果  31-35
    3.1.2 后期验证结果  35-39
  3.2 基因功能及定位分析  39-44
    3.2.1 基因功能总结  39-43
    3.2.2 基因功能定位  43-44
  3.3 测定胞内钙离子含量  44-47
第四章全文讨论  47-50
  4.1 Class E Vps 介导钙离子耐受  47-48
  4.2 VMA 家族与钙离子平衡  48
  4.3 PHO 家族与钙离子平衡  48-50
参考文献  50-54
发表论文和科研情况说明  54-55
致谢  55

酵母基因组中钙离子平衡相关基因的初步研究

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