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活性氧（ROS）对小鼠胚胎胚细胞数及分裂指数的影响

作　者: 柳海星
导　师: 方南洙
学　校: 延边大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 活性氧(ROS) 胚细胞数分裂指数
分类号: Q954.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

为了弄清哺乳动物早期胚胎体外发育阻滞的机制，人们不断地从胚胎内部以及外界环境中寻找原因。目前已经发现，损伤的细胞中含有较多的各类氧化物，包括过氧化氢以及其它自由基（例如过氧化物阴离子和氢氧根离子）；在因细胞分裂阻断以及细胞功能丧失所引起的异常细胞中也含有这些活性氧类（ROS）物质。本试验以昆明小鼠1-细胞期胚胎为实验对象，以CZB培养液为基础液在不同发育阶段添加外源性ROS，培养至桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚阶段，分别观察胚胎的胚细胞数、分裂指数的变化。从细胞水平上进一步证明外源性ROS是否对哺乳动物早期胚胎有影响。实验结果表明：1、体内发育的桑椹胚、早期囊胚、囊胚、扩张囊胚的每一胚胎平均细胞数分别为22.54、35.49、36.93、46.78其分裂指数分别为5.85、4.64、2.16、4.96；在CZB培养液中培养的每一胚胎平均细胞数分别为18.03、25.30、29.13、45.68其分裂指数分别为6.26、5.08、2.77、3.03。经统计分析体内桑椹胚、早期囊胚、囊胚的每一胚胎平均细胞数与体外桑椹胚、早期囊胚、囊胚的每一胚胎平均细胞数有显著差异；扩张囊胚的体内，体外每一胚胎平均细胞数没有显著差异。另外体内、外各时期胚胎的分裂指数均无显著差异。 2、早期囊胚的12-24h处理组和36-48h处理组的每一胚胎平均细胞数与0-72h处理组有显著差异；扩张囊胚0-72h处理组的分裂指数与0-12h处理组和24-36h处理组有显著差异，其它各组的胚细胞数和分裂指数均无差异。这就说明虽然胚胎在体外培养时期2-细胞期胚胎（0～12h处理组）对外源性H₂O₂最敏感，也最容易发生发育阻滞。但是经H₂O₂处理之后渡过2-细胞期阻滞的胚胎能在以后的发育中发生补偿性生长，其胚细胞数和分裂指数都和体外正常发育的胚胎没有差异。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-5
目录  5-7
第一章前言  7-14
  1.1 早期胚胎发育阻滞  8-9
  1.2 活性氧对胚胎体外发育的影响  9-11
  1.3 活性氧对细胞增殖和分化的影响  11-14
第二章材料与方法  14-25
  2.1 试验材料  14-15
    2.1.1 时间和地点  14
    2.1.2 供试小鼠  14
    2.1.3 主要药品  14-15
    2.1.4 主要仪器  15
  2.2 试验方法  15-22
    2.2.1 药品的配制  15-18
    2.2.2 小鼠胚胎的收集  18-19
    2.2.3 胚胎的液滴培养  19-20
    2.2.4 培养条件  20
    2.2.5 胚胎染色体标本的制作及观察  20-22
      2.2.5.1 胚胎染色体标本的制备  20-21
      2.2.5.2 胚胎染色体标本的观察  21-22
      2.2.5.3 分裂指数的计算方法  22
  2.3 试验内容  22-24
    2.3.1 昆明小鼠的超数排卵实验  22
    2.3.2 小鼠胚胎在体内发育时，不同发育阶段胚胎的胚细胞数和分裂指数  22
    2.3.3 小鼠胚胎在含过氧化氢的CZB培养液中培养时，不同发育阶段胚胎的胚细胞数和分裂指数  22-24
  2.4 统计处理方法  24-25
第三章结果与分析  25-34
  3.1 昆明母鼠超数排卵的结果  25
  3.2 体内发育和体外(CZB)培养的小鼠胚胎在，不同发育阶段胚胎标本的对比  25-27
  3.3 在体外CZB培养的不同时期添加过氧化氢培养时不同发育阶段胚胎的胚细胞数和分裂指数的比较  27-34
第四章讨论  34-37
  4.1 昆明鼠的超数排卵结果  34
  4.2 体内发育和体外(CZB)培养的小鼠胚胎，在不同发育阶段胚胎的胚细胞数的比较  34-35
  4.3 体外CZB培养的不同时期添加过氧化氢培养时胚胎的胚细胞数和分裂指数的比较  35-37
第五章结论  37-38
致谢  38-39
参考文献  39-41

活性氧（ROS）对小鼠胚胎胚细胞数及分裂指数的影响

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