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内毒素刺激对大鼠肺泡巨噬细胞内NF-κB和AP-1活性的影响及其对TNF-α表达的调控作用

作　者: 李春穴
导　师: 蒋建新；周继红
学　校: 第三军医大学
专　业: 外科学
关键词: NF-κB AP-1 内毒素肺泡巨噬细胞 TNF-α 硫代寡核苷酸圈套基因转染凝胶迁移阻滞分析(EMSA) 酶联免疫吸附测定法(ELISA)
分类号: R602
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

目的：观察内毒素刺激对大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核转录因子NF-κB、AP-1的活性影响；探讨核转录因子NF-κB、AP-1在LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞表达TNF-α中的调控作用。方法：(1)应用凝胶迁移阻滞技术(Electrophoretic mobility shift assay EMSA)检测LPS(E.coli 026:B6)刺激大鼠AM核蛋白中NF-κB、AP-1的DNA结合活性的动态变化；(2)在LPS刺激前12小时，应用转基因技术将NF-κB和AP-1的硫代寡核苷酸圈套(S-ODN decoy)转入大鼠AM；(3)应用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)观察NF-κB和AP-1的硫代寡核苷酸圈套(S-ODN decoy)及其组合圈套对LPS刺激大鼠AM表达TNF-α的影响。结果：(1)应用100ng/mlLPS刺激大鼠AM 0.5小时,NF-κB、AP-1即迅速出现活化，但之后NF-κB、AP-1呈现了不同变化趋势。NF-κB活性在1h达到峰值后，在3h、5h、8h活性逐渐下降，而AP-1活性在0.5h迅速活化并达到峰值后在1h活性下降，3h活性又逐渐回升，5 h 、8h又迅速回落，呈现明显的波动性。NF-κB、AP-1的活化状态均至少可以持续8小时；(2)LPS刺激与AM 内NF-κB、AP-1活性变化呈明显的量效关系，随着LPS刺激剂量增加，NF-κB、AP-1活性均逐渐增强；(3)NF-κB或AP-1的S-ODN圈套均能明显抑制LPS刺激大鼠AM表达TNF-α；(4)同时抑制NF-κB和AP-1的活性较单一作用要强，但均不能完全阻断LPS诱导的TNF-α表达。结论：LPS刺激可使大鼠AM内NF-κB、AP-1同时活化，<WP=8>二者在LPS介导的炎症反应中可能发挥重要作用；同时抑制NF-κB和AP-1的活性并不能完全阻断LPS刺激大鼠AM表达TNF-α，提示LPS诱导的大鼠AM 的TNF-α表达也可能与其它核转录因子有关。

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英文缩写一览表  3-5
英文摘要  5-7
中文摘要  7-9
论文正文内毒素刺激对大鼠肺泡巨噬细胞内NF-κB和AP-1活性的影响及其对TNF-α表达的调控作用  9-46
  前言  9-10
  实验材料  10-16
  实验方法  16-21
    实验一、LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞（AM）内NF-κB和AP-1活性的动态变化  16-19
    实验二、NF-κB和AP-1的S-ODN圈套对LPS刺激大鼠AM表达TNF-α的影响  19-21
  结果  21-32
    实验一、LPS刺激对大鼠AM内NF-κB和AP-1活性的影响  21-28
    实验二、NF-κB和AP-1S-ODN圈套对LPS刺激大鼠AM表达TNF-α的影响  28-32
  讨论  32-37
  结论  37-38
  致谢  38-39
  参考文献  39-46
文献综述NF-κB、AP-1在脓毒症发病中的作用及抗炎治疗的策略  46-69
  参考文献  59-69
研究生期间发表文章  69

内毒素刺激对大鼠肺泡巨噬细胞内NF-κB和AP-1活性的影响及其对TNF-α表达的调控作用

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