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中国明对虾和凡纳滨对虾凝集素的分离纯化及性质研究

作　者: 孙杰
导　师: 安利国；王雷
学　校: 山东师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 无脊椎动物中国明对虾凡纳滨对虾凝集素亲和层析模式识别蛋白唾液酸类糖蛋白肽质量指纹图谱
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

对虾是我国重要的海水养殖经济动物,但是其发展深受病害的影响,为进行病害防治及遗传育种等研究,对于对虾免疫机理的研究成为迫切的需要。解决大规模对虾疾病的根本途径是寻找免疫刺激剂提高对虾自身免疫力,而其前提是对虾免疫机理的研究。本文对对虾血清中的模式识别蛋白——凝集素进行了分离纯化和性质测定。本项研究利用3种不同物质:N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）,胎球蛋白（Fetuin）和小牛粘液素（BSM）为配基,分别与三种柱材料结合进行亲和层析,从中国明对虾血淋巴中纯化凝集素。这三种亲和层析均得到一种相同的凝集素FCL-1,经SDS/PAGE证明FCL-1分子量为168kDa。利用新鲜小鼠血细胞进行分离纯化同样获得了这种凝集素。同时对FCL-1的各种性质进行了研究,FCL-1能够与人的A、B、O型血细胞,以及小鼠、鸡血细胞相结合;与乙酰基糖类和唾液酸类糖蛋白均具有较强的结合特性;当温度超过75℃时,生物活性消失,最适pH为7-11;对Ca²⁺具有依赖性,对EDTA极为敏感;能够引起胃癌和肝癌细胞的轻微凝集;对鳗弧菌等鱼虾类致病菌具有较强的结合特性。肽指纹质量图谱显示这是一种新的蛋白质。同样利用胎球蛋白（Fetuin）亲和层析从凡纳滨对虾中（俗称南美白对虾）纯化了另一种凝集素LVL,它能够使人的A、B、O型血细胞及鸡血细胞凝集,它的生物活性依赖于Ca²⁺。LVL是由两个分别为32KD和38KD的亚基构成的分子量为172KD的蛋白质。它的最适pH为7-11,当温度超过75℃时,生物活性消失。与多种糖类和糖蛋白的抑凝实验表明,LVL与GalNAc,GluNAc等乙酰基糖类和富含乙酰基、唾液酸类物质的糖蛋白具有较强的结合特性。另外,LVL可以与多种鱼虾类致病菌相结合。

全文目录

摘要  6-7
ABSTRACT  7-9
第一章综述  9-21
  一、甲壳动物自然免疫概述  9-14
  二、甲壳纲动物凝集素的特点  14-17
  三、甲壳纲动物凝集素的纯化方法  17-21
第二章中国明对虾凝集素分离纯化方法的研究  21-31
  一、中国明对虾血清凝集效价的测定  21-22
  二、中国明对虾凝集素特异结合的糖类的测定  22-23
  三、分离纯化方法的研究  23-29
  四、结果分析  29-31
第三章中国明对虾凝集素FCL-1 的性质分析和鉴定  31-43
  一、中国明对虾凝集素FCL-1 凝集效价的测定  31-32
  二、中国明对虾凝集素FCL-1 特异结合的糖类的测定  32-34
  三、中国明对虾凝集素FCL-1 温度和PH 稳定性的研究  34-35
  四、中国明对虾凝集素FCL-1 对癌细胞的凝集研究  35-36
  五、中国明对虾凝集素FCL-1 对微生物的凝集研究  36-38
  六、中国明对虾凝集素FCL-1 特异结合的糖类的研究  38-39
  七、中国明对虾凝集素FCL-1 对CA~(2+)依赖性的研究  39
  八、中国明对虾凝集素 FCL-1 的肽指纹图谱(PMF)研究  39-40
  九、分析与讨论  40-43
第四章凡纳滨对虾凝集素的分离纯化与性质分析  43-53
  一、凡纳滨对虾凝集素特异结合的糖类的测定  43-44
  二、凡纳滨对虾凝集素的纯化  44-46
  三、凡纳滨对虾凝集素 LVL 的性质分析  46-51
  四、结果分析  51-53
参考文献  53-59
致谢  59-60
发表文章  60

中国明对虾和凡纳滨对虾凝集素的分离纯化及性质研究

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