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南美响尾蛇神经毒素对人肺鳞癌SK-MES-1细胞生长抑制作用研究

作　者: 王俊华
导　师: 何靖康
学　校: 苏州大学
专　业: 心胸外科
关键词: 南美响尾蛇神经毒素人肺鳞癌SK-MES-1细胞凋亡移植瘤
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

第一部分南美响尾蛇神经毒素对人肺鳞癌SK-MES-1细胞体外生长抑制作用及其相关机制目的:观察南美响尾蛇神经毒素(Crotoxin,CrTX)体外抗肿瘤作用,并初步探讨其相关作用机制。方法:以人肺鳞癌SK-MES-1细胞为实验对象,通过四氮唑盐还原法(MTT)、细胞集落平板克隆实验观察CrTX、吉非替尼(Iressa)及两药联合应用对SK-MES-1细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术检测CrTX对SK-MES-1细胞凋亡率及细胞周期的影响;细胞间接免疫荧光染色法检测p-JNK蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定CrTX作用后SK-MES-1细胞内p-JNK、BCL-2及Caspase-3活性亚单位P17蛋白表达水平,并以SP600125抑制JNK活性后观察CrTX对人肺鳞癌SK-MES-1细胞的影响。结果:CrTX对人肺鳞癌SK-MES-1细胞有生长抑制作用,与Iressa联用可增强Iressa抗肿瘤效果;CrTX对SK-MES-1细胞有诱导凋亡和G1期阻滞作用,并可引起人肺鳞癌SK-MES-1细胞p-JNK、Caspase-3活性亚单位P17蛋白表达上调及抑凋亡基因BCL-2下调;而用SP600125抑制JNK活性后,CrTX对人肺鳞癌SK-MES-1细胞诱导凋亡作用基本消失,p-JNK、Caspase-3活性亚单位P17及抑凋亡基因BCL-2蛋白表达水平无明显变化。结论:CrTX对人肺鳞癌SK-MES-1细胞体外生长有抑制作用,其作用与诱导凋亡和G1期阻滞有关,其中诱导凋亡作用系激活JNK信号通路、磷酸化BCL-2,进而活化Caspase-3所致。第二部分南美响尾蛇神经毒素对人肺鳞癌SK-MES-1细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用研究目的:观察南美响尾蛇神经毒素(Crotoxin,CrTX)对人肺鳞癌SK-MES-1细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用及其对移植瘤组织微血管生成的影响。方法:裸鼠皮下接种人肺鳞癌SK-MES-1细胞建立裸鼠移植瘤模型,分对照组,CrTX(10ug/kg生理盐水稀释后腹腔注射2次/周)组,吉非替尼(Iressa)(100 mg/kg/day)组,联合用药组(CrTX+Iressa);给药四周后比较移植瘤瘤重,计算抑瘤率;并用免疫组化法测定移植瘤微血管密度(microvessd density,MVD)及透射电镜观察移植瘤微血管内皮超微结构改变。结果:CrTX,Iressa均对人肺鳞癌SK-MES-1细胞移植瘤生长有抑制作用,二者联合应用可显著提高抑瘤作用,其抑瘤率分别是21.36%、22.88%及35.92%,差异有统计学意义(均P<0.05);免疫组化MVD计数示CrTX组、Iressa组及联合用药组均较对照组明显减少,差异有统计学意义(均P<0.05);电镜观察示:CrTX组、Iressa组及联合用药组移植瘤微血管数量较对照组明显减少,微血管内皮细胞结构有不同程度损害,其中联合用药组最为明显。结论: CrTX对人肺鳞癌SK-MES-1细胞移植瘤生长有抑制作用,并可减少移植瘤组织内微血管生成。

南美响尾蛇神经毒素对人肺鳞癌SK-MES-1细胞生长抑制作用研究

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