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基于实时荧光定量PCR和xMAP液态芯片技术检测NSCLC组织/血清miRNA的方法建立及其应用的研究

作　者: 王亚南
导　师: 顾国浩
学　校: 苏州大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: microRNA miRNA NSCLC 实时荧光定量PCR xMAP液态芯片
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的建立非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织/血清microRNA(miRNA)的实时荧光定量PCR和xMAP液态芯片的检测方法,用其对NSCLC患者组织和血清miRNA的表达变化进行检测并进行分析,探讨miRNA在NSCLC发生发展中的作用及其在NSCLC诊断、治疗、预后中的应用价值。方法第一部分建立基于实时荧光定量PCR检测NSCLC患者组织/血清miRNA的方法,用该法检测40例NSCLC患者癌组织与癌旁组织的miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222、miR-223、miR-145、miR-126的表达变化;检测40例NSCLC患者血清和40例正常对照组血清miR-21、miR-20a和miR-222的表达变化;并对20例血清与组织配对标本的miR-21、miR-20a和miR-222表达水平作相关性分析。第二部分建立基于xMAP液态芯片技术检测NSCLC患者组织miRNA的方法,用该法检测40例NSCLC患者癌组织与癌旁组miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222、miR-223、miR-145、miR-126的表达变化;对实时荧光定量PCR和xMAP液态芯片技术检测miRNA的表达变化作比较分析和评价。结果第一部分基于实时荧光定量PCR技术检测miRNA的方法既能有效对NSCLC患者组织miRNA又能对其血清miRNA作定量分析;NSCLC患者癌组织miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222较癌旁组织呈高表达(P<0.05),其中miR-31、miR-20a呈显著高表达,增高倍数大于2(P<0.01);而miR-223、miR-145、miR-126呈低表达(P<0.05)。miR-21表达随病情进展而逐渐升高;miR-222表达随分化程度的降低、肿块直径的增大而升高;miR-126表达随病情的进展和分化程度的降低而降低。NSCLC患者血清miR-21、miR-20a、miR-222呈高表达(P<0.05),其中miR-222呈显著高表达,增高倍数大于2。miR-222表达随病情的发展、分化程度的降低、肿块直径的增大而升高。NSCLC患者癌组织miR-21、miR-20a、miR-222表达水平与其血清表达水平呈正相关,相关系数分别为0.898、0944、0.946。第二部分基于xMAP液态芯片技术高通量检测NSCLC患者组织miRNA的方法初步建立成功,用该法检测NSCLC患者组织miRNA表达,结果发现NSCLC癌组织miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222较癌旁组织呈高表达(P<0.05),而miR-145、miR-126呈低表达(P<0.05),miR-223无显著性差异(P>0.05)。实时荧光定量PCR和xMAP液态芯片技术检测miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222、miR-145和miR-126相关性较好,相关系数分别为0.631、0.717、0.604、0.810、0.601、0.702。而miR-223相关系数仅为0.105,可能不具相关性。结论(1)基于实时荧光定量PCR和xMAP液态芯片技术检测NSCLC组织/血清miRNA的方法具有特异性高,灵敏度好的特点;xMAP液态芯片技术检测miRNA还具有所需的标本量少(仅需2μl)、不需要样本基因扩增、高通量、多指标灵活组合同时检测等优点。(2)miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222、miR-145、miR-126这6种miRNA在NSCLC癌组织和癌旁组织中的表达有显著性差异,具有十分重要的诊断价值。(3)NSCLC血清和癌组织miR-21、miR-20a、miR-222表达水平均显著增高且具正相关性,miR-21、miR-20a、miR-222这3种miRNA有望成为诊断NSCLC的血清标志物。(4)miR-21、miR-20a、miR-31、miR-222可能以高表达形式,而miR-145、miR-126可能以低表达形式参与了NSCLC的发生发展。

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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