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共振光散射成像分析技术开发及其在生化分析中的应用

作　者: 郭宏平
导　师: 黄承志
学　校: 西南师范大学
专　业: 分析化学
关键词: 共振光散射技术共振光散射成像技术共振光散射成像-微流控技术铬聚合物蛋白质核酸肝素盐酸小檗碱
分类号: O657.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

基于光散射粒子高的光发射能力,在临床检验和生物分析、超灵敏免疫检测和DNA探针分析中进行光散射微粒标记显微成像分析已引起人们广泛关注。实验证明应用共振光散射（RLS）粒子作为标记比荧光标记的灵敏度能够得到显著提高。本文在普通RLS技术的基础上,建立了一种共振光散射成像技术,可以观察到单个聚集粒子的光散射性质,通过对单个散射粒子的光散射信号检测,实现了生物大分子及药物分子的分析测定。研究内容包括下列四个方面: （1）研究了铬水解聚合物的光谱性质,并且运用共振光散射（RLS）光谱研究其与核酸的相互作用。铬聚合物在415nm和580 nm处具有特征吸收,在350 nm处具有最大荧光发射。在酸性条件下,铬聚合物与核酸作用产生强烈增强的RLS信号,其特征峰位于299.0 nm,据此讨论无机聚合物试剂与生物大分子之间的作用,并建立了核酸的分析方法。（2）在酸性介质中,当蛋白质存在时,四-（对磺基苯基）卟啉（TPPS₄）和四-（5-磺基噻吩）卟啉[T（5-ST）P],可以发生J-聚集,从而导致增强的RLS信号,且其特征峰分别位于490.0 nm与469.0 nm处。运用488 nm氩离子激光光源激发溶液中的聚集粒子,在与激光光束呈直角的方向,我们可以通过普通的显微镜观察到单个聚集粒子的散射光,并且能够用一个冷却型电荷耦合装置（CCD）进行成像。对这些数字化图像进行数据分析的结果表明,在焦平面上检测到的聚集粒子个数与溶液中的蛋白质浓度成正比,据此建立了灵敏测定蛋白质的分析方法,并且成功地用于人血清样品中蛋白质的测定。（3）在中性介质中,四（四-氨基苯基）卟啉（TAPP）与肝素通过静电和疏水作用相互结合,在430.0nm处产生RLS特征峰。在441.6 nm He-Cd激光线的激发下,单个TAPP-肝素聚集粒子的光散射信号可以通过普通的显微镜观察到,并且能够用CCD对其成像进行表征。数据分析表明,焦平面一定面积内的成像粒

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