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以壳聚糖为载体制备适合于抗体分离的介质研究

作　者: 崔国艳
导　师: 应国清；易喻
学　校: 浙江工业大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 壳聚糖反相悬浮法金属螯合 hCG单抗
分类号: R943
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

为了找寻可替代现有的葡聚糖、琼脂糖等昂贵多糖介质的可替代品,本论文以来源丰富的壳聚糖为原料,采用反相悬浮法制备壳聚糖微球,经环氧氯丙烷(ECH)活化,亚氨基二乙酸(IDA)螯合金属离子制备适于抗体纯化的新型壳聚糖分离介质,并以此为基础,开展了纯化人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体的研究。主要研究结论如下：通过对微球制备过程中各影响因素的研究,获得了较佳的制备条件,结果表明,当乙酸浓度2%、壳聚糖浓度3%、交联剂用量为2.5 mL、搅拌速度为350 r/min、油水体积比为1:1.5、NaOH溶液浓度为2.5mol/L,成球率可达到90%以上,球形好,分布窄的红棕色壳聚糖微球。以自制的壳聚糖微球为载体,ECH为活化剂,IDA为螯合剂,制备新型的壳聚糖分离介质,其较佳制备工艺为：在DMSO(0.4,体积分数)和0.6 mol/L NaOH混合溶液反应体系中,加入10%ECH(体积分数),在40℃反应4h,此时环氧基修饰密度可达到0.15 mmol/g;然后键合IDA,在0.6 mol/L IDA和NaOH(2.0 mol/L)混合溶液体系中,60℃条件下反应6 h,制备的新型壳聚糖分离介质对Cu2+吸附量达到172.79 mg/g(干介质),以BSA为标准蛋白,考察壳聚糖分离介质的吸附性能,结果表明,其对BSA的吸附符合Langmuir吸附特征,最大吸附量qm为60.61 m∥g,KD为1.39,3 h后达到吸附平衡。利用自制的壳聚糖分离介质为固定相,纯化hCG单抗。结果表明：在pH 8.0,20 mM磷酸缓冲液+0.5 M NaCl条件下上样,然后在20 mM醋酸钠缓冲液+0.5M NaCl条件下通过pH分步洗脱,当pH=5.0时得到抗体峰,纯度大于61%,回收率达57%。

以壳聚糖为载体制备适合于抗体分离的介质研究

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