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抑抗汤调节不明原因不孕症患者子宫内膜白血病抑制因子表达的研究

作　者: 陈健
导　师: 应小燕
学　校: 南京医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: 抑抗汤 白血病抑制因子 不明原因不孕症 免疫组化 real-time quantitative PCR
分类号: R271.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


背景原因不明不孕症是指不孕夫妇双方通过标准检查程序仍未明确不孕原因者,约占不孕症患者的10-20%,其中2/3原因不明不孕症推测为与胚胎着床困难有关。长期以来其不确切的病因及非针对性的治疗一直困扰着医务工作者。虽然随着辅助生殖技术的发展和进步,能够解决一部分不孕症患者的生育问题,但是总的成功率一直徘徊在30-40%左右。主要由当归、赤白芍、地黄、山萸肉、山药、菟丝子、柴胡、甘草组成的抑抗汤在治疗该类患者时有独特的疗效,但是该药物的具体作用机制不明确,限制了它在临床上的应用。白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor LIF)是一类与胚胎着床密切相关的细胞因子,动物实验已经证明,LIF基因敲除的小鼠能产生胚泡,但不能着床,将此小鼠胚泡植入到野生假孕小鼠体内,能着床并成功发育,证明LIF是小鼠胚泡着床过程中必不可少的因子之一,在人类,LIF的分泌高峰期出现在月经中晚期,与胚胎着床的窗口期相一致,在不明原因不孕症患者和孕早期反复自然流产的患者中,发现其子宫内膜在分泌中晚期表达LIF水平较正常受孕妇女明显减少。另外,在一部分接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)失败的患者中,也发现子宫内膜表达LIF水平低下与胚胎不能着床密切相关。因此前期我们通过酶联免疫吸附实验方法(ELISA)对门诊十余例服用抑抗治疗的患者,在服药前后黄体中晚期宫腔冲洗液中LIF的含量进行检测,发现服药后LIF的平均含量较服药前明显升高,为进一步了解抑抗汤对LIF的影响,本研究拟采用免疫组织化学和实时荧光定量PCR技术检测服用抑抗汤前后,患者黄体中晚期子宫内膜组织LIF转录和蛋白表达的情况,从而进一步了解抑抗汤作用的分子机制。目的通过研究抑抗汤对不明原因不孕症患者分泌中晚期子宫内膜白血病抑制因子蛋白和基因表达水平的影响,了解抑抗汤治疗不明原因不孕症的作用机制。方法不明原因不孕症患者20例,口服标准量抑抗汤两个月,收集服药前后排卵第十天的子宫内膜组织,首先应用RT-PCR初步了解不孕症患者服药前、后黄体晚期子宫内膜组织表达LIFmRNA水平的差异,然后采用实时荧光定量PCR对服药前后子宫内膜LIF基因转录水平进行定量验证,并以免疫组化鉴定其在服药前后子宫内膜蛋白水平的表达情况。结果不孕症患者治疗前、后子宫内膜LIF荧光定量PCR的Ct值分别为9.79±0.91和4.60±1.24,两者相比差异有显著性(P<0.01),表明治疗后子宫内膜LIF的转录水平明显高于治疗前。免疫组化结果显示LIF表达在子宫内膜腺上皮细胞的细胞浆内,且治疗后蛋白水平的表达较治疗前明显增强(P<0.05)。对20例服药患者随访半年,有4例在服药半年内成功受孕。结论抑抗汤能够提高不明原因不孕症患者子宫内膜分泌中晚期LIF的表达,抑抗汤治疗不明原因不孕症可能是通过促进子宫内膜LIF的分泌来实现的。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
前言  9-11
资料与方法  11-19
结果  19-23
讨论  23-27
小结  27-28
参考文献  28-33
综述一  33-41
  参考文献  38-41
综述二  41-50
  参考文献  46-50
攻读学位期间发表论文情况  50-51
致谢  51

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中医妇产科 > 妇科病
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