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麦门冬合千金苇茎汤抗肺癌效应物质基础及其苇茎的化学成分研究

作　者: 高浩学
导　师: 丁安伟；唐于平
学　校: 南京中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 麦门冬汤千金苇茎方麦门冬合千金苇茎汤物质基础抗肺癌苇茎化学成分
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

本论文课题来源于国家“十一五”科技支撑计划:高容量分析中药复方调控肺癌信号转导通路的系统生物学研究（2006BAI11B08-01）。麦门冬合千金苇茎汤是名老中医周仲瑛先生经过长期临床实践发现的治疗肺癌的经验方,由麦门冬汤和千金苇茎方两个经典名方相合而成。麦门冬汤见于张仲景《金匮要略·肺痿肺痈咳嗽上气病脉证治》,“火逆上气,咽喉不利,止逆上气者,麦门冬汤主之”。千金苇茎方出自于孙思邈《千金要方·肺痈第七》,能清肺化痰,逐瘀排脓,主治肺痈。现代药理学研究证实麦门冬汤和千金苇茎方具有抑制肿瘤生长,提高免疫能力。本课题试图通过麦门冬合千金苇茎汤的效应物质基础研究,为阐明该该合方治疗肺癌的科学内涵提供依据,为方剂现代研究提供研究思路与方法。本论文第一部分对中药复方在治疗肺癌方面的研究进行了综述,并对麦门冬汤和千金苇茎方的化学成分、药理作用以及临床应用等方面的研究进行了分析归纳。本论文第二部分为实验内容,首先将麦门冬合千金苇茎汤进行水提、醇沉、萃取等方法得到8个化学物质部位（MW-01～MW-08）,并采用MTT法对这些部位进行了抗肺癌细胞A549生物效应进行评价。从而确定具有生物活性的部位,分别为乙酸乙酯部位和正丁醇部位,尤以乙酸乙酯部位抗肺癌效应最好。利用硅胶柱层析和重结晶等方法从该合方乙酸乙酯部位分离得到11个化学成分,并通过理化性质和光谱分析鉴定为对羟基苯甲酸、香豆酸、异香草酸、甘草素、异甘草素、4’-O-[2-hydroxypropanoyl-（6）-D-glucopyranoside]、芒柄花素、尿嘧啶、琥珀酸、β-谷甾醇、豆甾醇。同时从正丁醇部位得到琥珀酸酐、尿嘧啶、人参皂苷Rg3、甘露醇。体外抗肺癌细胞A549实验结果表明,芒柄花素、尿嘧啶、人参皂苷Rg3、琥珀酸、伊谷甾醇具有明显的抑制肺癌细胞A549生长的作用。采用UPLC-DAD-Q-TOF-MS技术,通过与对照品比对紫外吸收光谱及质谱数据,最终鉴定了效应部位9个化学成分,分别为对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、香草酸、甘草苷、4’-O-[2-hydroxypropanoyl-（6）-D-glucopyranoside]、异甘草苷、甘草素、异甘草素和芒柄花素。采用HPLC-DAD方法同时测定了麦门冬合千金苇茎汤效应部位中7个酚类化学成分（对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、香豆酸、香草酸、甘草苷、甘草素、异甘草素）。其色谱条件为Waters sunfire C₁₈（250mm×4.6mm,5um）色谱柱,柱温25℃,乙腈-0.5%醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0ml/min,对羟基苯甲酸和甘草苷的检测波长为277.4nm。其余化合物检测波长为297.4nm。利用柱层析等方法从苇茎的乙醇提取物中分离得到14个化合物,通过1H-NMR、¹³C-NMR、2D NMR和MS等鉴定其结构分别为:金色酰胺醇酯、阿魏酸、对香豆酸、丁香酸、2,3-dihydroxy-1-（4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl）-1-propanone、异香草酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛、棕榈酸、十七烷酸、β-谷甾醇、豆甾醇、α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖。对得到的各单体成分进行抗肺癌细胞A549生物活性评价,结果表明金色酰胺醇酯和阿魏酸都有明显的抑制肺癌细胞A549生长作用。本论文的特色和创新点为:1、化学分离与药理研究紧密结合:首先对复方及其主要药味各分离部位进行生物活性评价,确定其有效部位;然后对有效部位采用现代色谱分析技术得到化学成分,并对其进行活性评价,从而推定复方中可能的活性物质,从而为阐明复方治疗作用的效应物质基础提供依据。2、各种先进仪器分析方法的采用:各种现代色谱技术,尤其是UPLC-QTof-MS与全自动HPLC分析系统为复方复杂化学物质的分析检识与同时多成分定量分析研究提供了强大可靠的技术保障。3、麦门冬合千金苇茎汤是名老中医周仲瑛先生经过长期临床实践发现具有明显的治疗肺癌作用,通过本论文的化学物质基础和生物效应的结合研究,为创制防治肺癌中药新药奠定基础。

全文目录

中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
前言  11-12
第一部分绪论  12-35
  第一章中药复方治疗肺癌的研究概况  12-22
    参考文献  19-22
  第二章麦门冬汤与千金苇茎方抗肺癌的研究进展  22-35
    参考文献  34-35
第二部分实验研究  35-75
  第三章麦门冬合千金苇茎汤抗肺癌效应物质基础研究  35-59
    第一节麦门冬合千金苇茎汤各化学物质部位的制备  35-38
    第二节麦门冬合千金苇茎汤各部位抗肺癌细胞A549生物效应评价  38-44
    第三节麦门冬合千金苇茎汤活性部位的成分分离与鉴定  44-48
    第四节麦门冬合千金苇茎汤单体成分抗肺癌细胞A549生物活性评价  48-50
    第五节麦门冬合千金苇茎汤效应部位的成分分析与含量测定  50-58
    参考文献  58-59
  第四章苇茎的化学成分研究  59-75
    第一节苇茎的化学成分、药理作用、临床研究进展  59-68
    第二节苇茎的化学成分分离与结构鉴定  68-72
    第三节苇茎中化学成分体外抗肺癌细胞A549生物活性评价  72-73
    参考文献  73-75
附图化合物光谱图  75-91
攻读硕士学位期间发表的学术论文  91-92
致谢  92

麦门冬合千金苇茎汤抗肺癌效应物质基础及其苇茎的化学成分研究

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