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海参虫草复剂降血糖作用及其机制的研究

作　者: 傅佳
导　师: 王静凤
学　校: 中国海洋大学
专　业: 食品科学
关键词: 海参 蛹虫草 降血糖 抗氧化 葡萄糖转运蛋白4 磷脂酰肌醇-3-激酶 蛋白激酶B
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


海参(sea cucumber)是具有较高食用和药用价值的海洋生物资源。化学分析及药理学研究表明,海参体壁富含海参多糖、海参皂苷和海参蛋白多肽等多种活性物质,具有抗肿瘤、抗氧化、降血压和提高免疫力等生物活性。蛹虫草(Cordyceps militaris)是目前冬虫夏草的最佳替代品,其含有的活性成分包括虫草多糖、虫草酸和虫草素等,并证实具有增强免疫力、降血脂、抗氧化和降血糖等多种活性。目前已被列为我国的新资源食品。中医理论认为,海参性温补,蛹虫草味甘性平,二者组方合用,可增强生津养阴,益气温阳的功效。本论文利用腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)的方法建立糖尿病大鼠模型,灌胃由日本刺参(Apostichopus japonicas)与蛹虫草配成的复剂,研究海参虫草复剂的降血糖活性,并对其作用机制进行初步探讨。主要研究结果如下：海参虫草复剂具有显著的降血糖作用。糖尿病大鼠灌胃给予海参虫草复剂35d后,大鼠空腹血糖含量显著降低(P<0.01)。海参虫草复剂不但能显著提高大鼠的葡萄糖耐量(P<0.01),提高机体对葡萄糖的耐受力,还能显著提高大鼠血清胰岛素含量(P<0.01)、胰岛素分泌指数(P<0.01)和p细胞功能指数(P<0.05)；增加肌、肝糖元的含量(P<0.01)。提示海参虫草复剂对糖尿病大鼠体内葡萄糖代谢具有较好的调控作用。海参虫草复剂显著地降低了糖化血红蛋白和糖化血清蛋白含量(P<0.01),表明海参虫草复剂能较好的控制糖尿病病情的发展。结果表明,海参虫草复剂良好的降血糖效果与其有效改善体内的葡萄糖代谢水平、控制病情恶化有关,并且海参虫草复剂的降血糖效果明显好于海参、蛹虫草单剂作用。海参虫草复剂具有提高抗氧化能力和保护胰岛p细胞的作用。海参虫草复剂能显著提高肝脏中SOD、CAT和GSH-Px酶的活力(P<0.01)；高剂量海参虫草复剂能显著提高胰腺中CAT酶活力(P<0.01)。采用HE染色和透射电镜技术研究了海参虫草复剂对糖尿病大鼠胰腺组织的显微和亚显微结构的影响。结果表明：灌胃海参虫草复剂的糖尿病大鼠,其胰岛破坏程度减轻,形态恢复正常,胰岛p细胞的数量明显增多。电镜下可观察到β细胞结构与正常对照组接近,细胞界限清晰。细胞核呈圆形,核膜光滑；核仁清晰且染色质分布均匀；胞质内的细胞器结构肿胀程度较模型对照组明显减轻。提示海参虫草复剂能提高机体和胰腺的抗氧化能力,较好的保护了胰岛β细胞结构,使其结构完整,提高其合成和分泌胰岛素的功能。利用RT-PCR和Western Blot的方法检测了糖尿病大鼠外周组织中胰岛素信号通路关键蛋白激酶和葡萄糖转运蛋白4(Glucose transporter4, Glut4)的mRNA及蛋白表达,并对其降血糖机制进行了探讨。结果表明：海参虫草复剂能提高肌肉和脂肪组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)、蛋白激酶B(Protein kinase B, PKB/Akt)和Glut4的mRNA表达。肌肉组织中,海参虫草复剂低、高剂量组PI3K mRNA的表达量与模型对照组比较具有显著性差异(P<0.01)；高剂量能明显提高Glut4 mRNA的表达。脂肪组织中,复剂高剂量组的PI3K mRNA表达量提高了42.86%,而复剂低、高剂量组Glut4的表达量平均提高了32.63%,相比于模型对照组均具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。另外,海参虫草复剂能增强糖尿病大鼠脂肪组织中Glut4的蛋白表达,呈现剂量效应关系。提示海参虫草复剂通过调节胰岛素信号通路,增强葡萄糖转运蛋白Glut4的表达,促进外周组织对葡萄糖的利用,达到降血糖的目的。本实验较为系统全面的评价了海参虫草复剂的降血糖活性,并对其机制进行了初步探讨。为海参虫草复剂的高值化开发利用提供了理论依据。

全文目录


摘要  6-8
Abstract  8-15
0 前言  15-35
  1 糖尿病概述  15-17
    1.1 Ⅰ型糖尿病的发病机制  15-17
      1.1.1 遗传因素  15-16
      1.1.2 环境因素  16
      1.1.3 自身免疫  16-17
    1.2 Ⅱ型糖尿病的发病机制  17
      1.2.1 肥胖  17
      1.2.2 胰岛素抵抗  17
  2 氧化应激与糖尿病  17-21
    2.1 高血糖介导自由基产生的主要途径  18-19
      2.1.1 葡萄糖氧化  18
      2.1.2 蛋白质非酶糖化  18-19
      2.1.3 炎症因子损害及氧化还原能力不足  19
    2.2 氧化应激对糖尿病的影响  19-21
      2.2.1 氧化应激对胰岛细胞的损伤  19-20
      2.2.2 氧化应激对胰岛素生物学效应的影响  20
      2.2.3 抗氧化治疗对胰岛的保护作用  20-21
  3 胰岛素信号通路及葡萄糖转运蛋白4(GLUCOSE TRANSPORTER 4,GLUT4)  21-26
    3.1 胰岛素、胰岛素受体及其底物  21-23
    3.2 胰岛素信号转导通路  23-24
    3.3 胰岛素信号通路对Glut4的影响  24-26
      3.3.1 Glut4简介及其生物作用  24-25
      3.3.2 胰岛素信号通路对Glut4的调节作用  25-26
  4 海参活性物质及其生物活性  26-30
    4.1 海参多糖  27-28
    4.2 海参皂苷  28-30
    4.3 海参胶原蛋白及活性肽  30
  5 蛹虫草活性物质及其生理功效  30-33
    5.1 虫草多糖  31-32
    5.2 虫草素  32
    5.3 虫草酸  32-33
    5.4 SOD酶  33
  6 立题依据及研究的目的和意义  33-35
第一章 海参虫草复剂降血糖作用的研究  35-45
  1 材料和方法  35-38
    1.1 材料  35-36
      1.1.1 海参、蛹虫草及海参虫草复剂  35
      1.1.2 实验动物  35
      1.1.3 主要试剂  35-36
      1.1.4 实验仪器  36
    1.2 方法  36-38
      1.2.1 模型建立和动物分组  36-37
      1.2.2 空腹血糖的测定  37
      1.2.3 葡萄糖耐量的测定  37
      1.2.4 胰岛素含量的测定  37
      1.2.5 糖化血红蛋白含量的测定  37
      1.2.6 糖化血清蛋白含量的测定  37-38
      1.2.7 肌糖元及肝糖元含量的测定  38
      1.2.8 尿量及尿糖含量的测定  38
    1.3 统计学方法  38
  2 结果  38-43
    2.1 对空腹血糖的影响  38-39
    2.2 对葡萄糖耐量的影响  39
    2.3 对胰岛素含量、胰岛素分泌指数和β细胞功能指数的影响  39-40
    2.4 对糖化血红蛋白含量的影响  40-41
    2.5 对糖化血清蛋白含量的影响  41-42
    2.6 对肝糖元含量的影响  42
    2.7 对肌糖元含量的影响  42-43
    2.8 对尿量和尿糖含量的影响  43
  3 讨论  43-44
  本章小结  44-45
第二章 海参虫草复剂抗氧化及对胰腺保护作用的研究  45-57
  1 材料和方法  45-48
    1.1 材料  45-46
      1.1.1 海参、蛹虫草及海参虫草复剂  45
      1.1.2 实验动物  45
      1.1.3 主要试剂  45-46
      1.1.4 主要仪器  46
    1.2 方法  46-48
      1.2.1 动物分组和实验  46
      1.2.2 肝脏、胰腺中SOD、GSH-Px和CAT活力测定  46-47
      1.2.3 胰腺组织的一般形态观察  47
      1.2.4 胰腺组织的透射电镜观察  47-48
    1.3 统计学处理  48
  2 结果  48-54
    2.1 对肝脏中抗氧化酶活力的影响  48-49
    2.2 对胰腺中抗氧化酶活力的影响  49-50
    2.3 对胰岛组织显微结构的影响  50-51
    2.4 胰岛β细胞的亚显微观察结果  51-54
  3 讨论  54-56
  本章小结  56-57
第三章 海参虫草复剂对胰岛素信号转导通路的影响  57-72
  1 材料和方法  57-64
    1.1 材料  57-60
      1.1.1 海参、蛹虫草及海参虫草复剂  57-58
      1.1.2 实验动物  58
      1.1.3 主要试剂  58
      1.1.4 主要仪器  58-59
      1.1.5 主要制剂的配制  59-60
    1.2 方法  60-64
      1.2.1 动物分组和实验  60
      1.2.2 肌肉及脂肪组织中PI3K、Akt和Glut4 mRNA表达的测定  60-63
      1.2.3 Western blot法测定肌肉及脂肪组织中Glut4蛋白的表达  63-64
    1.3 统计学处理  64
  2 结果  64-68
    2.1 对肌肉组织PI3K、Akt和Glut4 mRNA表达的影响  64-65
    2.2 对脂肪组织PI3K、Akt和Glut4 mRNA表达的影响  65-66
    2.3 对肌肉中Glut4蛋白表达的影响  66-67
    2.4 对脂肪中Glut4蛋白表达的影响  67-68
  3 讨论  68-71
  本章小结  71-72
结论  72-73
本论文的特色及创新之处  73-74
参考文献  74-86
硕士期间发表论文情况  86-87
致谢  87-88
个人简历  88

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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