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壳寡糖及其衍生物对大鼠受损心肌细胞和组织的保护作用

作 者: 房子
导 师: 刘万顺
学 校: 中国海洋大学
专 业: 海洋生物
关键词: 壳寡糖 羧甲基壳寡糖 异丙肾上腺素 心肌梗塞 细胞凋亡
分类号: R542.22
类 型: 硕士论文
年 份: 2004年
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内容摘要


心肌梗塞是一种常见的、严重危害人类身心健康的疾病,目前临床上治疗心梗的方法有冠状动脉搭桥术(CABG)、经皮穿刺腔内冠状动脉成型术(PTCA)、新型的血管重建治疗如激光心肌血管重建术(TMLR)和血管内皮生长因子(VEGF)诱导血管重建术及冠状动脉旁路移植术等,严重时需心脏移植。但这些方法均存在一定的不足,如PTCA术的再狭窄率可达10-30%,其长期死亡率较高;TMLR虽能使大多数顽固性心绞痛患者疼痛缓解,但多数患者的缓解是短期的,而且考虑到死亡和复发的因素以及高昂的费用,许多国家都撤销了TMLR治疗的批准;心脏移植则存在供体缺乏、费用昂贵、机会性感染、排斥反应和移植心脏冠心病的隐患。因此,国内外对预防性心脏给药的研究非常重视。如何对有功能的心肌细胞在受损的同时进行有效的保护和促进心肌细胞的再生,已成为目前治疗心肌梗死和提高患者远期生存率的关键。 目前在抗心肌损伤的临床药物研究中,以FDP(1,6-二磷酸果糖)为代表的小分子糖类的应用和研究比较活跃。受此启发,将小分子量的壳寡糖及其衍生物首次应用于抗心肌损伤的研究中,以期筛选出具有临床应用前景和价值的预防与治疗心肌梗塞药物。 本实验以大鼠心肌细胞为研究对象,从细胞水平研究了不同浓度羧甲基壳寡糖(carboxymethyl chito-oligosaccharide,CM-COS)、壳寡糖(chito-oligosaccharide,COS)、N-乙酰氨基葡萄糖(N-acetyl glucosamine,NAG),氨基葡萄糖(glucosamine,GluNH2)对体外培养的心肌细胞的保护作用。细胞实验结果表明,在浓度为1000μg/mL时CM-COS对受损心肌的保护作用最好,120μg/mL的NAG和800μg/mL的COS的保护效果次之。 以Wistar大鼠为实验动物,在制作异丙肾上腺素(Isoprotenenol,Iso)造成的心肌梗塞模型的基础上,从生化水平、组织学水平和微观形态学水平等研究了COS及其衍生物对受损心肌的保护作用。分析结果证明在150造成心梗模型的治疗中,CM一COS静脉注射组有显著的保护心肌损伤的效果,其抗损伤效果与阳性药物心得安灌胃组很相似,而NAG、COS尾静脉注射组保护效果稍差。 最后,以动物模型中心肌组织为研究对象,在分子水平上初步探讨了壳寡糖及其衍生物对心肌梗塞造成的心肌细胞凋亡的抑制作用。结果表明:阳性药物心得安灌胃组和CM一COS尾静脉注射保护组的心肌组织DNA与正常对照组相比都稍有降解,但均没有出现典型的DNA Ladder现象,说明CM一COS对心肌的凋亡均有抑制作用。 本实验结果提示CM一COS在预防与治疗心肌梗塞药物研究方面具有潜在的研究价值。

全文目录


中文提要  5-7
英文提要  7-9
缩略语表  9-10
第一章 壳寡糖及其衍生物与心血管疾病治疗的研究现状  10-23
  第一节 心血管疾病治疗的研究现状  10-18
    1.1 成熟心肌细胞的特点和研究历史  10-11
    1.2 心肌细胞分裂和增殖的调控因素  11
    1.3 心血管疾病的病理机制  11-15
    1.4 心血管疾病治疗途径  15-18
  第二节 壳寡糖及其衍生物的研究概述  18-23
    2.1 壳寡糖及其衍生物的理化性质  18
    2.2 壳寡糖及其衍生物的生物活性  18-20
    2.3 壳聚糖及其衍生物在药剂中的应用  20
    2.4 壳聚糖及其衍生物在医学中的应用  20-22
    2.5 壳聚糖及其衍生物在组织工程中的应用  22-23
第二章 壳寡糖及其衍生物的制备与分离纯化  23-40
  第一节 前言  23-24
  第二节 壳寡糖及其衍生物的制备与分离纯化方法  24-40
    2.1 概述  24
    2.2 材料、试剂与仪器  24-25
    2.3 实验方法  25-27
    2.4 产物质量标准与检测  27-31
    2.5 实验结果  31-38
    2.6 讨论  38-40
第三章 壳寡糖及其衍生物对心肌细胞损伤模型保护作用的评价  40-54
  第一节 前言  40-43
    1.1 心肌细胞损伤模型  40-41
    1.2 保护作用评价指标  41-43
  第二节 心肌细胞异丙肾上腺素损伤模型的建立  43-46
    2.1 材料、试剂与仪器  43-44
    2.2 实验方法  44
    2.3 实验结果  44-46
  第三节 壳寡糖及衍生物对细胞损伤模型保护作用的筛选和评价  46-54
    3.1 概述  46
    3.2 材料、试剂与仪器  46
    3.3 实验方法  46-48
    3.4 实验结果与讨论  48-54
第四章 壳寡糖及其衍生物对心梗模型保护作用的评价  54-73
  第一节 前言  54-55
  第二节 异丙肾上腺素所致大鼠心梗模型的建立、分组和给药  55-57
    2.1 材料、试剂与仪器  55
    2.2 实验方法  55-57
  第三节 壳寡糖及其衍生物对心梗模型保护作用的组织学与酶学评价  57-73
    3.1 概述  57
    3.2 材料、试剂与仪器  57-58
    3.3 实验方法  58-60
    3.4 实验结果与讨论  60-73
第五章 壳寡糖及其衍生物对大鼠心梗模型心肌梗死区细胞凋亡抑制作用的探讨  73-81
  第一节 心肌细胞凋亡与检测方法  73-78
    1.11 so与心肌细胞凋亡  73-74
    1.2 细胞凋亡的检测方法  74-78
  第二节 受损大鼠心肌细胞DNA Ladder分析  78-81
    2.1 概述  78
    2.2 试剂、缓冲液与仪器设备  78-79
    2.3 实验材料与方法  79-80
    2.4 DNA Ladder实验结果  80-81
第六章 总结  81-83
参考文献  83-92
致谢  92

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管(循环系)疾病 > 心脏疾病 > 心肌疾病 > 心肌梗塞
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