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组胺和花生四烯酸体外诱导变态反应性炎症的发生及其干预

作　者: 潘虎
导　师: 郝飞
学　校: 第三军医大学
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 咪唑斯汀趋化因子细胞因子鼻息肉皮肤
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

背景与目的:变态反应性疾病是皮肤科的一类常见病、多发病,因此研究其发病机制并寻求有效的治疗方法有重要的意义。目前的观点认为,组胺和花生四烯酸及代谢产物在变态反应性炎症过程中起关键的作用,它们分别参与速发相反应和迟发相反应。此类疾病的治疗多选择抗组胺药物、皮质类固醇激素等。最近国外有研究证实,组胺和其特异性H1受体结合后,可以在信号水平激活核转录因子-κB,从而在基因水平促进多种炎症因子mRNA的表达,最终导致多种炎症因子的大量表达,参与和加重炎症反应;而组胺H1受体拮抗剂可以拮抗此效应。本文分别用鼻息肉、皮肤组织做体外培养,加入组胺和花生四烯酸等刺激物诱发炎症反应;同时加入不同的抗炎药物,观察组胺和花生四烯酸是否能激发炎症反应以及不同药物对炎症反应的拮抗作用效果,为临床选择抗炎药物提供实验依据。方法:分别选取鼻息肉和皮肤组织做体外培养,首先加入咪唑斯汀、西替利嗪、氯雷他定、环孢素A、地塞米松、非索非那定等抗炎药物,然后加入组胺和花生四烯酸诱发炎症反应,同时设置只加入组胺和花生四烯酸而不加抗炎药物的阳性对照和不加任何药物的阴性对照。取培养后的组织提取RNA做RT-PCR检测单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、单核细胞趋化蛋白-3(monocyte chemotactic protein-3,MCP-3)、活化后可调节的正常T细胞表达分泌的因子(regulated upon activation, normal T cell expressed and secreted,RANTES)和嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)等趋化因子mRNA的表达情况,ELISA法检测培养后上清液中白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等细胞因子的含量,观察组胺和花生四烯酸是否诱发炎症反应以及各种药物对抗炎症反应的效果。实验还用不同浓度的咪唑斯汀和鼻息肉组织在加入组胺和花生四烯酸后一起做体外培养,观察咪唑斯汀对抗炎症反应的效果以及是否有剂量依赖关系。结果:1、实验成功地对鼻息肉和皮肤组织进行了体外培养,提取了培养后组织中的RNA并进行了PT-PCR法检测了各目的基因的表达情况,同时检测了培养上清液中各细胞因子的浓度。2、鼻息肉组织体外培养实验结果表明,组胺和花生四烯酸在体外成功地诱发炎症<WP=9>反应;咪唑斯汀组与阳性对照组相比较各研究指标均明显下降,P<0.05,提示能有效地对抗此炎症反应。比较不同的抗炎药物发现,咪唑斯汀对培养后息肉组织中MCP-1基因表达的抑制作用明显强于氯雷他定和非索非那定(P<0.05),对MCP-3表达的抑制明显强于西替利嗪(P<0.05)、氯雷他定(P<0.01),对RANTES表达的抑制明显强于氯雷他定和非索非那定(P<0.05),对eotaxin表达的抑制明显强于西替利嗪和非索非那定(P<0.05);与咪唑斯汀共同培养组中的上清液中IL-4的含量明显低于与西替利嗪、氯雷他定、非索非那定共同培养组(P<0.05),IL-5的含量也明显低于西替利嗪、氯雷他定、非索非那定培养组(P<0.05),而各组间TNF-α的含量没有显著性的差异。3、皮肤组织体外培养实验结果表明,组胺和花生四烯酸在体外成功地诱发炎症反应;咪唑斯汀组与阳性对照组相比较各研究指标的P值均<0.05,提示能有效地对抗此炎症反应。比较不同的抗炎药物发现,咪唑斯汀对培养后皮肤组织中MCP-1基因表达的抑制作用明显强于氯雷他定(P<0.01)、非索非那定(P<0.05),对MCP-3表达的抑制明显强于西替利嗪和非索非那定(P<0.05),对RANTES表达的抑制明显强于氯雷他定(P<0.05),各药物对eotaxin表达的抑制无明显差别;与咪唑斯汀共同培养组中的上清液中IL-4的含量明显低于与非索非那定共同培养组(P<0.05),IL-5的含量明显低于西替利嗪和氯雷他定(P<0.01)、非索非那定培养组(P<0.05),而TNF-α的含量明显低于西替利嗪培养组(P<0.05)。4、不同浓度的咪唑斯汀与鼻息肉组织共同培养后,咪唑斯汀能明显抑制MCP-1、MCP-3、RANTES、eotaxin等趋化因子mRNA的表达;同时也能明显降低上清液中IL-4、IL-5、TNF-α等细胞因子的含量(P<0.01);并且随着咪唑斯汀浓度的增加,其抑制各种炎症因子表达的作用也增强,显示出良好的剂量依赖性。结论:1、组胺和花生四烯酸在与机体组织体外共同培养时,能使MCP-1、MCP-3、RANTES和eotaxin等趋化因子和IL-4、IL-5、TNF-α等细胞因子的表达上调。2、与多种药物相比较,咪唑斯汀对MCP-1、MCP-3、RANTES和eotaxin等趋化因子和IL-4、IL-5、TNF-α等细胞因子的表达抑制作用强于西替利嗪、氯雷他定、非索非那定等,而与环孢素A、地塞米松等没有显著性差别,提示咪唑斯汀对抗组胺和花生四烯酸诱发的炎症反应作用强于西替利嗪、氯雷他定、非索非那定等药物。3、不同浓度的咪唑斯汀对上述各种炎症因子表达的抑制也有显著性差异,随着浓度的增加,咪唑斯汀对炎症因子的抑制作用也增强,表现出良好的剂量依赖性。

全文目录

英文缩写一览表  4-6
英文摘要  6-8
中文摘要  8-10
论文正文组胺和花生四烯酸体外诱导变态反应性炎症的发生及其干预  10-58
  前言  10-14
  第一节鼻息肉和皮肤组织的体外培养实验  14-17
  第二节逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测培养后息肉及皮肤组织中趋化因子mRNA的表达情况  17-34
  第三节 ELISA法检测组织培养上清液中细胞因子浓度  34-46
  讨论  46-52
  参考文献  52-56
  全文总结  56-57
  致谢  57-58
文献综述  58-67
  参考文献  64-67
硕士期间文章发表情况  67

组胺和花生四烯酸体外诱导变态反应性炎症的发生及其干预

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