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猪细小病毒感染对猪外周血淋巴细胞细胞因子转录时相影响的研究

作　者: 李金磊
导　师: 魏战勇
学　校: 河南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪细小病毒外周血淋巴细胞实时定量PCR 细胞因子转录时相
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

猪细小病毒(Porcine Parvovirus, PPV)是引起猪繁殖障碍综合症的主要病原,可引起死产、木乃伊胎、胚胎的早期死亡及不孕不育等。除了临床上导致繁殖障碍,猪细小病毒还能引起皮炎、肠道等疾病。作为一个能显著导致经济损失的疾病,近年来猪细小病毒在世界范围内普遍流行,感染和造成的危害呈上升趋势,给养猪业造成了巨大的经济损失。细胞因子能介导抗病毒状态的建立及募集炎性细胞向感染部位聚集,不仅在抵抗疾病的过程中发挥重要作用,而且是清除感染所必需的。对于猪细小病毒致病机制的研究多集中在病毒的复制及感染过程,而对病毒与细胞间的作用关系、猪细小病毒感染引起宿主细胞因子的变化规律的研究尚未见报道。为了了解猪细胞因子对PPV感染的免疫反应机制,阐明PPV的致病机理,我们进行了以下研究:1.利用实时定量PCR分别对PPV感染猪PBMC后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h细胞中的PPV DNA水平及IFN-β、IFN-γ、IFNAR-1、IFNAR-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、MX1、iNOS、2-5OAS、RNaseL和IRF-3等干扰素及相关细胞因子mRNA分泌水平进行检测。结果发现,PPV感染猪外周血淋巴细胞后1 h即能检测到PPV DNA,24 h后PPV开始迅速增殖,在感染后72 h达到峰值,为10倍多。IFNAR-1 mRNA的表达量在1 h、24 h显著增加,其中1 h为89.9倍;IFNAR-2 mRNA的表达量在24 h达到高峰,其他时间无明显差异;IFN-βmRNA的表达量在1 h达到高峰,24 h显著下调;IFN-γmRNA的表达量在48 h显著增加,24 h显著下调;MHC-ⅠmRNA的表达量在1 h、12 h、48 h显著增加,48 h达到高峰;IRF-3、RNaseL mRNA的表达量在48 h显著增加,其它时间表达差异不显著;MX1、2-5OAS mRNA的表达量在24 h、48 h显著增加,24 h达到高峰;MHC-ⅡmRNA的表达量在1 h、3 h、6 h、12 h显著增加,3 h达到高峰;iNOS mRNA在1 h不表达,3 h表达量显著增加,24 h显著下调。PPV感染可引起猪PBMC分泌抗病毒相关因子显著增加。2.利用实时定量PCR分别对PPV感染猪PBMC后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h细胞中的IL-1β、6、8、12p35、12p40、13、17和18等炎性细胞因子mRNA分泌水平进行检测。结果发现PPV感染猪PBMC后IL-1βmRNA的表达量在1h、3 h、6 h、12 h、24 h显著增加,24 h达到高峰为58倍;IL-6 mRNA的表达量在1h、3 h、6 h、12 h、24 h、72 h显著增加,6 h达到高峰为40.5倍;IL-12p35 72 h显著增加,24 h显著减少;IL-12p40 1 h显著增加,24 h显著减少;IL-8在1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h显著增加,24 h达到高峰为59.7倍;IL-13在3 h显著增加,12h、24 h显著减少;IL-17在1 h、48 h显著增加,6 h、12 h、24 h显著减少;IL-18在6 h显著增加。PPV感染可引起猪PBMC分泌炎性相关因子显著增加。3.利用实时定量PCR分别对PPV感染猪PBMC后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h细胞中的TNF-α、TNFR-2、P53、PBR、Bcl-2、Bcl-xl、Caspase-8和FasL等凋亡细胞因子mRNA分泌水平进行检测。结果发现PPV感染猪PBMC后TNF-αmRNA的表达量在1 h显著增加,随后逐渐降低,24 h显著减少;TNFR-2 24 h显著减少为0.25倍,48 h显著增加为11.5倍;P53在1 h和72 h有轻微增加,6 h、12 h、24 h减少;PBR在1 h、24 h、48 h显著增加,24 h达到高峰为12.9倍;Bcl-2在1 h有轻微增加,其他时间减少,24 h显著减少;Bcl-xl在24 h显著减少,72 h显著增加;Caspase-8在1 h、24 h显著增加,1 h达到高峰为19.3倍;FasL在1 h显著增加,24 h显著减少为0.02倍。PPV感染可引起猪PBMC分泌凋亡相关因子显著变化。综上所述,本试验分别对PPV在猪PBMC中的增殖规律及PPV感染后猪PBMC干扰素及相关细胞因子、炎性细胞因子、凋亡相关细胞因子的转录时相进行了研究,为进一步了解细胞因子的免疫学作用机制及PPV的分子致病机制提供试验依据,为预防和治疗PPV及相关药物的筛选和研制奠定了理论基础。

全文目录

致谢 4-6摘要 6-8缩略词表 8-9文献综述 9-16 1 猪细小病毒的概述 9-12 2 细胞因子概述 12-15 3 实时荧光定量 PCR 技术在细胞因子研究上的应用 15-16引言 16-17试验一猪细小病毒对猪外周血淋巴细胞干扰素等抗病毒相关因子转录时相的影响 17-27 1 材料与方法 17-19 2 结果 19-23 3 讨论 23-27试验二猪细小病毒感染对猪外周血淋巴细胞对细胞炎性细胞因子转录时相影响的研究 27-35 1 材料与方法 27-29 2 结果 29-31 3 讨论 31-35试验三猪细小病毒感染对猪外周血淋巴细胞凋亡相关因子转录时相影响的研究 35-43 1 材料与方法 35-37 2 结果 37-39 3 讨论 39-43全文总结 43-44参考文献 44-55ABSTRACT 55-57

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