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脱钙异体骨关节移植修复兔关节软骨缺损的关节滑液蛋白质组学研究

作　者: 陈文雄
导　师: 李斯明
学　校: 广州医学院
专　业: 骨科学
关键词: 脱钙骨关节软骨再生二维凝胶电泳质谱分析
分类号: R687.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:如何妥善修复各种原因导致的关节软骨损伤多年来一直是各国研究人员致力解决的重要问题。越来越多的证据表明,生长因子在关节软骨生理生长的各个过程如增殖、成熟、基质代谢等均扮演着重要的角色,以信号调节的方式对关节软骨损伤的修复起着复杂的促进作用。脱钙异体骨关节对关节软骨损伤修复的诱导作用已被大量实验证实。本研究将脱钙骨关节移植至新西兰大白兔膝关节缺损处,通过体液蛋白质组学的分法分析移植后关节滑液中各种蛋白与不移植组的差别,以期寻找移植后在关节软骨再生过程中机体产生的特异性蛋白,并据此来探讨关节软骨再生过程中相关蛋白的作用机制和模型。方法:先行制备保护关节软骨的脱钙异体骨关节,然后再选取20只新西兰大白兔,均在左侧膝关节股骨髌骨沟中心处造成直径4mm、深度3mm的关节软骨缺损,并随机分成2组,Ⅰ组为实验组,在关节软骨缺损处移植入脱钙骨关节,Ⅱ组为空白对照组,旷置关节软骨缺损。此后定期在移植术当天、移植术后第8周、第12周、第16周、第24周分别抽取各组关节液并进行二维凝胶电泳,以及MADLI-TOF-TOF-MS分析和相关数据库查证鉴定,与空白对照组进行对比分析。结果:成功建立新西兰大白兔关节软骨缺损模型,并利用制备好的脱钙骨关节诱导机体修复软骨缺损,通过二维凝胶电泳对兔膝关节滑液中所产生的各种蛋白质进行分离,发现实验组与对照组相比出现了显著的差异蛋白点。按照实验原理应有的变化趋势,在上述差异蛋白质点中筛选出23个有意义的差异点,在进一步的质谱分析中,根据各个差异点的分子量和肽段序列,在数据库中进行搜索和查询,确定在实验组中出现了GI值分别为187735841、163796533、736808的与关节软骨再生可能相关的三种蛋白。结论:在关节软骨再生的过程中关节滑液产生了特异性的蛋白质,此三种蛋白质及其所属族群的作用分别为:GI值为187735841的Tape measure蛋白与维持细胞功能密切相关,参与基因表达的过程启动;GI值为163796533的DNA/RNA解旋酶属于SNF2家族,在基因复制、修复与表达中具有重要作用;GI值为736808的对氧磷酶蛋白具有抗氧化性,在减轻细胞毒性,保护细胞免受损伤、氧化等因素破坏上有着重要作用。根据自身及其相关族群的功能推测,这三种蛋白的功能可能与关节软骨的再生修复相关。这为进一步揭示关节软骨再生过程的本质,寻找促进关节软骨再生的关键环节提供新思路和新线索,也为更深入地研究关节软骨的再生机制奠定了基础。

全文目录

英文缩略词表  3-5
中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
前言  9-12
材料与方法  12-17
  一、材料  12
  二、方法  12-17
结果  17-21
讨论  21-33
小结  33-34
参考文献  34-38
综述  38-54
  参考文献  47-54
致谢  54-55

脱钙异体骨关节移植修复兔关节软骨缺损的关节滑液蛋白质组学研究

内容摘要

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