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右旋美托咪定对大鼠急性肺损伤的保护作用及机制的研究

作　者: 史琪清
导　师: 苏子敏
学　校: 复旦大学
专　业: 麻醉学
关键词: 右旋美托咪定大鼠急性肺损伤核因子KB Toll样受体4
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：观察右旋美托咪定对大鼠急性肺损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法：将大鼠随机分为6组,分别为正常对照组(NS,0.5 ml)、LPS模型组(LPS,4 mg/kg)、高、中、低剂量右旋美托咪定组(Dex 4.5 u g/kg、1.5μg/kg, 0.5μg/kg)及育亨宾拮抗组(YHB,0. 1mg/kg),每组8只。大鼠腹腔内注射1%戊巴比妥钠30 mg/kg后,将其固定,颈前正中切口行气管插管并保留自主呼吸,切开右侧股静脉插管用于静脉给药。各Dex组大鼠按上述设定剂量分别予Dex 0.5μg/kg、1.5μg/kg、4.5μg/kg。除NS组外,其余各组大鼠均予LPS 4 mg/kg(溶于NS 0.5 ml); NS组注射生理盐水0.5 ml/kg; YHB组则另注育亨宾0.1 mg/kg。6h后处死大鼠,分离肺组织,记录其外观,并称重计算肺脏器系数(全肺重/体重)。取大鼠右下肺叶,记湿肺质量,置于80℃真空干燥仪干燥72 h,记干肺质量,计算湿／干重比值(W/D)。取大鼠右中肺叶,称重后用生理盐水制备成10%匀浆,收集上清液,通过Elisa法测定肿瘤坏死因子(TNF-a)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)炎症因子浓度。取大鼠右上肺叶,置于10%甲醛液中固定24 h,常规石蜡包埋,切片,苏木精-伊红(HE)染色,封片,光学显微镜下观察肺病理组织学变化。同时通过免疫组化法测定NF-κB蛋白的表达。取大鼠左肺叶,用RT-PCR法测定大鼠肺组织TLR4受体表达。结果：(1)大体观察各组大鼠肺组织,NS组肺组织表面光滑,呈淡粉红色,无充血水肿及梗死灶,触之弹性较好；LPS组大鼠肺组织呈现暗红色,肺包膜下明显充血水肿,可见广泛出血点,弹性较差；各Dex组大鼠可见肺组织表面色泽暗红,充血水肿,有散在出血点,但较LPS组少,且随Dex剂量的增加,肺损伤的程度有所减少。(2)与NS组相比,LPS组大鼠肺脏器系数、肺湿/干重比明显增高(P<0.01)；与LPS组相比,高、中剂量Dex组的大鼠肺脏器系数和湿/干重比明显降低(P<0.05或P<0.01)：(3)与NS组相比,LPS组大鼠肺匀浆TNF-α、IL-1β和IL-6水平明显升高,(P<0.01)；与LPS组相比,高、中剂量Dex组大鼠肺匀浆炎症因子水平显著下降(P<0.05或P<0.01); YHB组大鼠肺匀浆炎症因子除TNF-a外,IL-1β和IL-6水平均有所下降(P<0.05或P<0.01)；与YHB组相比,高、中低剂量Dex组大鼠肺匀浆炎症因子水平显著下降(P<0.01)。(4)光镜下可见LPS组大鼠肺组织结构明显被破坏,主要表现为肺泡内出血、肺间质水肿、肺泡萎陷以及肺组织内大量炎性细胞浸润。与LPS组相比,预先应用Dex各组大鼠肺组织的损伤程度减轻,表现为肺间隔轻度增宽、无明显出血、少量炎性细胞浸润,尤其高剂量组,减轻程度最为明显。(5)免疫组化结果显示,NS组大鼠气道黏膜上皮和肺间质中,仅见少量散在的NF-κB核阳性细胞,而LPS诱导急性肺损伤后,气道黏膜、肺间质、肺泡腔及血管内皮细胞中NF-κB核阳性的细胞明显增多,各Dex剂量治疗组随着剂量增加,NF-κB核阳性细胞较LPS组呈减少趋势。半定量结果显示,与LPS组相比,Dex高中剂量组NF-κB染色的灰度值呈不同程度减少,明显低于LPS组(P<0.01)。(6) RT-PCR结果显示肺内TLR4 mRNA的表达,LPS组水平明显升高(P<0.01)；与LPS组相比,高、中剂量Dex组mRNA水平显著下降(P<0.05或P<0.01)；与YHB组相比,高Dex剂量组大鼠mRNA水平显著下降(P<0.01)。结论：使用高、中剂量的Dex能使肺脏器系数、肺湿／干重比值下降,保护肺泡膜,减轻间质水肿及炎性细胞浸润、渗出,IL-1β、IL-6等炎性因子下调,NF-κB蛋白及TLR4 mRNA表达减少,减轻了肺部的炎症反应程度,具有肺保护作用。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-10
引言  10-12
材料和方法  12-20
结果  20-29
讨论  29-36
结论  36-37
参考文献  37-40
综述  40-46
  参考文献  44-46
致谢  46-47

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