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Annexin V/PI和Hoechst33342/PI双染法评价无镍奥氏体不锈钢的生物相容性

作　者: 张辉
导　师: 战德松
学　校: 中国医科大学
专　业: 口腔修复学
关键词: AnnexinV/PI Hoechst33342/PI 无镍奥氏体不锈钢细胞凋亡生物相容性
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的本实验用中科院金属研究所研制的新型无镍奥氏体不锈钢BIOSSN4的浸提液培养小鼠成纤维细胞L929,通过AnnexinⅤ/PI双染和Hoechst33342/PI双染荧光显微镜观测细胞凋亡形态,利用流式细胞仪检测细胞凋亡率,探讨通过凋亡途径初步检测评价BIOSSN4不锈钢的生物相容性。材料与方法1、实验分组及金属材料制备将实验材料共分为六组,分别是A组：BIOSSN4不锈钢；B组:317L不锈钢；C组：钴铬合金；D组：镍铬合金；E组：金合金；F组：阴性对照(10%胎牛血清RPMI1640培养液)。其中A组为实验组,余为对照组。根据合金浸提液与L929细胞共同培养的时间分为24 h组及48 h组。先制作成直径10mm、厚1mm的圆形蜡片,然后将各组材料分别铸造形成圆形金属片,打磨抛光后超声清洗15min,去离子水冲洗3遍,分置于玻璃小瓶中,121℃高压灭菌后待用。2、材料浸提液制备无菌下将各金属圆片分置于24孔板中,每孔加2mL含10%胎牛血清RPMI1640培养液,在37℃、5%CO2培养箱中连续浸提72h后待用。3、细胞培养L929细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640细胞培养基在37℃、5%CO2培养箱中培养并传代。4、细胞凋亡检测将阴性对照组及各实验组合金浸提液与L929细胞共同培养,于培养的24 h、48 h进行FITC/PI双染,荧光显微镜下观察各组凋亡细胞,通过流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；Hoechst33342/PI双染,荧光显微镜下观察各组凋亡细胞,计算凋亡率。结果1、Annexin V-FITC/PI双染和Hoechst33342/PI双染,荧光显微镜观察实验各组均可见凋亡细胞,镜下检测凋亡率由低到高顺序为：金合金<BIOSSN4不锈钢<钴铬合金<317L不锈钢<镍铬合金。2、流式细胞仪检测：各组细胞凋亡率由低到高顺序与镜下检测结果相一致。加样培养24 h细胞凋亡率,BIOSSN4组与各组差异有显著性意义(p<0.05)；48 hBIOSSN4组与金合金组差异无显著性意义(p>0.05),与其它合金组差异有显著性意义(p<0.05)。各组24 h和48 h组间细胞凋亡率差异有显著性意义(p<0.05)。结论本实验结果证实：不同金属合金引起的细胞凋亡率存在差异,凋亡途径初步检测BIOSSN4不锈钢具有较好的生物相容性。

全文目录

一、摘要  4-8
  中文论著摘要  4-6
  英文论著摘要  6-8
二、英文缩略语  8-9
三、论文  9-25
  前言  9-10
  材料和方法  10-13
  实验结果  13-19
  讨论  19-24
  结论  24-25
四、本研究创新性的自我评价  25-26
五、参考文献  26-28
六、附录  28-40
  综述  28-38
    参考文献  35-38
  在学期间科研成绩  38-39
  致谢  39-40
  个人简介  40

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