学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性与分子检测

作　者: 苏平
导　师: 朱建兰；周增强
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 苹果轮纹病菌戊唑醇敏感性 ITS(Internal Transcribed Spacer) β-微管蛋白柑橘葡萄座腔菌
分类号: S436.611
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 53次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

苹果轮纹病是苹果生产上的一种重要病害,主要危害苹果枝干和果实,因其防治难、危害重,是目前我国苹果生产的重要制约因素之一。为了明确苹果轮纹病菌对三唑类杀菌剂戊唑醇的敏感性现状,从有代表性的苹果种植区采集、分离了98个苹果轮纹病菌（Botryosphaeria berengeriana f.sp.Piricola）菌株,采用菌丝生长速率法测定其对戊唑醇的敏感性。结果表明,戊唑醇对98个菌株的EC₅₀值在0.0054—3.3253 mg/L,平均值为0.4256±0.1090 mg/L。其中,菌株XX2B(EC₅₀为3.3253 mg/L)对戊唑醇的敏感性较低,QF2(EC₅₀为0.0054 mg/L)对其最敏感,其毒力倍数是XX2B的620.38倍。山东省、陕西省、河南省和辽宁省的苹果轮纹菌对戊唑醇的EC₅₀平均值分别为0.57150.4612 mg/L、0.5348 0.6935 mg/L、0.4020 0.1006 mg/L和0.2667 0.2083 mg/L,表明辽宁省的苹果轮纹菌对戊唑醇的敏感程度最高,山东省的敏感性最低。但不同地理来源的苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性差异不明显。应用人工接种的方法,对不同地理区域、不同敏感性的33个B.berengriana f.sp.piricola在苹果枝干上接种后的致病力分化进行了研究。结果显示:苹果轮纹病菌菌株存在致病力分化现象,来自苹果主产区33株苹果轮纹病菌接种在苹果枝条上的病情指数平均值为25.94±4.82,不同的菌株接种在苹果枝条上的病情指数差异显著。采用3种不同的提取方法（尿素提取法、氯化苄提取法以及SDS-CTAB提取法）对苹果轮纹病菌的基因组DNA进行提取和比较。结果表明,三种方法均能提取到苹果轮纹病菌的基因组DNA。其中,SDS-CTAB法效率最高,提取的DNA质量最好,但是耗时较长;尿素提取法操作简单快速,但是提取的DNA质量较低;氯化苄提取法获得的DNA纯度最低,蛋白质污染严重。三种方法所提取的DNA经ITS试验检测与电泳结果分析表明:DNA扩增效果良好,可满足该真菌rDNA ITS分析的要求。利用引物ITS1/ITS4和Bt2a/Bt2b克隆了苹果轮纹菌ITS序列和β-tubulin基因片段并测序。截取苹果轮纹菌rDNA的ITS和β-tubulin基因序列,与其它轮纹菌进行核苷酸序列比对,发现敏感性较低的三株苹果轮纹菌（QF8B,PL7,XX2B）与Botryosphaeria rhodina的ITS和β-tubulin序列相似性高达99%。构建苹果轮纹菌与其它轮纹菌ITS序列和β-tubulin基因的系统发育树,发现这三个菌与Botryosphaeria rhodina单独聚成一个分支,这说明柑橘葡萄座腔菌Botryosphaeria rhodina可能会侵染苹果并引起苹果轮纹病。

全文目录

摘要  2-4
Summary  4-9
第一章文献综述  9-19
  1.1 国内外苹果生产状况  9-10
    1.1.1 国外苹果生产状况  9
    1.1.2 国内苹果生产状况  9-10
  1.2 苹果轮纹病研究概况  10-16
    1.2.1 葡萄座腔菌属（Botryosphaeria）真菌  10
    1.2.2 苹果轮纹病的发生、危害及防治  10-12
    1.2.3 苹果轮纹病菌的病原学研究  12-14
    1.2.4 苹果轮纹病菌的分子生物学研究  14-16
  1.3 本研究的目的和意义  16-17
  1.4 本研究的主要内容及技术路线  17-19
第二章苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性检测  19-37
  2.1 材料和方法  19-23
    2.1.1 材料  19-22
    2.1.2 方法  22-23
  2.2 敏感基线的建立  23
  2.3 数据处理  23-24
  2.4 结果与分析  24-35
    2.4.1 苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性水平  24-27
    2.4.2 不同地理来源的苹果轮纹病菌菌株对戊唑醇敏感性水平  27-30
    2.4.3 不同地理来源菌株对戊唑醇敏感性水平的系统聚类分析  30-35
    2.4.4 河南省苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感基线  35
  2.5 结论与讨论  35-37
第三章对戊唑醇敏感性不同的菌株田间致病力测定  37-43
  3.1 材料与方法  37-39
    3.1.1 供试菌种来源  37-38
    3.1.2 接种材料  38
    3.1.3 接种方法  38
    3.1.4 调查方法  38-39
  3.2 结果与分析  39-41
    3.2.1 苹果轮纹病菌的致病力测定  39-40
    3.2.2 病情指数的聚类分析  40-41
  3.3 结论与讨论  41-43
第四章苹果轮纹病菌DNA 提取方法比较  43-53
  4.1 材料与方法  43-47
    4.1.1 供试菌株  43
    4.1.2 主要试剂和仪器  43-45
    4.1.3 菌体培养和收集  45
    4.1.4 DNA 提取方法  45-46
    4.1.5 结果分析  46
    4.1.6 rDNA-ITS 片断的PCR 扩增及电泳检测  46-47
  4.2 结果与分析  47-50
    4.2.1 三种基因组DNA 提取方法、DNA 产量和纯度的比较  47-49
    4.2.2 三种提取方法的DNA 和ITS 扩增结果  49-50
  4.3 结论与讨论  50-53
第五章对戊唑醇敏感性不同菌株的ITS 和β-tubulin 基因序列分析  53-75
  5.1 材料与方法  53-55
    5.1.1 供试菌株来源  53
    5.1.2 主要试剂和仪器  53
    5.1.3 菌体培养和收集  53
    5.1.4 菌体基因组总DNA 提取  53
    5.1.5 rDNA-ITS 片断和β-tubulin 基因的PCR 扩增及电泳检测  53-54
    5.1.6 PCR 产物回收  54-55
    5.1.7 核苷酸序列的测定  55
    5.1.8 序列对比和系统发育树的构建  55
  5.2 结果与分析  55-73
    5.2.1 总量DNA 的提取、rDNA 的PCR 扩增、纯化和测序  55-57
    5.2.2 ITS 序列分析  57-65
    5.2.3 β-tubulin 基因序列分析  65-73
  5.3 结论与讨论  73-75
第六章结论与创新点  75-76
  6.1 主要结论  75
  6.2 创新点  75-76
参考文献  76-81
致谢  81-82
导师简介  82-83
个人简介  83-84
附图  84-87

苹果轮纹病菌对戊唑醇的敏感性与分子检测

内容摘要

全文目录

相似论文