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马尾树内生真菌D4115活性代谢产物研究
作 者: 罗珊珊
导 师: 李海燕
学 校: 昆明理工大学
专 业: 生物化工
关键词: 马尾树 内生真菌 活性代谢产物 抗菌活性
分类号: S718.81
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
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内容摘要
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植物内生菌指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物组织内部而不引起宿主植物明显症状改变的菌。植物内生菌的代谢产物极其丰富,并具有抗菌、抗肿瘤、杀虫、刺激植物生长等多种生物活性,具有潜在的开发价值。本文以濒危单科单属植物马尾树(Rhoiptelea chiliantha)的一株抗菌活性内生真菌D4115为研究对象,对其液体发酵活性代谢产物和对中药重楼(Paris polyphylla)转化的产物进行分离、纯化和结构鉴定,并对所得化合物进行抗菌和抗肿瘤活性测定,以期从中筛选获得一些结构新颖、活性较好的化合物,为新药研发和植物内生真菌资源的开发利用打下基础。通过薄层层析、硅胶柱层析和凝胶柱层析等方法,我们从马尾树内生真菌D4115液体发酵产物的菌丝甲醇提取物中分离得到5个化合物,根据核磁共振谱(NMR)、DEPT谱和质谱(MS)等波谱数据已解析出其中2个化合物的结构,即化合物甲基-p-D-吡喃葡萄糖甙(β-D-Glucopyranoside, methy) (LSS4)和化合物6,7,8,8a-tetrahydro-4aH-pyrano[3,3-b]pyrazin-7,8-diol (LSS6),其中化合物LSS4为一已知化合物,而LSS6为一新化合物。从菌株D4115对中药重楼的转化产物中分离得到2个化合物,目前已对其中一个化合物LSS5的结构进行了初步解析,发现该化合物结构新颖,且较为复杂,目前正在补充其二维谱、元素分析和高分辨质谱等谱图,以便进一步确定其结构。在以香蕉疫霉(Phytophthora nicotianae)、腐皮镰孢霉(Fusarium solani)、大肠杆菌(Escherichia coli)等8种植物病原菌作指示的抑菌实验中发现,化合物LSS5对香石竹疫霉、腐皮镰刀菌和金黄色葡萄球菌均有抑菌作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好,最小抑菌浓度为25μg/片。化合物LSS4无抑菌活性,而化合物LSS6由于量太少因此暂时未做生理活性实验,需等全部谱图数据测定完之后才能进行。马尾树内生真菌D4115经形态和分子鉴定,确定为围小丛壳菌[Glomerella cingulata (Stonem.) Spauld.& Schrenk],即胶孢炭疽菌的无性型。
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全文目录
摘要 4-5 Abstract 5-9 插图和附表清单 9-10 缩略词 10-11 第一章 前言 11-27 1.1 植物内生真菌 11-14 1.1.1 植物内生菌的概念 11 1.1.2 植物内生真菌的生物学意义 11-13 1.1.3 植物内生真菌产生的活性物质 13-14 1.2 马尾树及马尾树内生真菌简介 14-15 1.3 胶孢炭疽菌及其次生代谢物的开发应用 15-20 1.3.1 胶孢炭疽菌的活性代谢产物 16-18 1.3.2 胶孢炭疽菌的开发应用 18-19 1.3.3 胶孢炭疽菌的生物转化应用 19-20 1.4 真菌对中药活性化合物的生物转化 20-25 1.4.1 生物转化 20-21 1.4.2 真菌转化中草药的作用机理 21-24 1.4.3 中药重楼的生物转化 24-25 1.5 本课题的研究目的、意义和内容 25-27 第二章 实验材料与方法 27-36 2.1 实验材料 27-29 2.1.1 菌株 27 2.1.2 药品和材料 27 2.1.3 仪器设备和试剂 27-28 2.1.4 培养基 28-29 2.2 实验基本流程 29-30 2.3 实验方法 30-36 2.3.1 内生真菌鉴定 30-31 2.3.2 内生真菌抗菌活性测定 31 2.3.3 滇重楼的微生物转化 31 2.3.4 抑菌实验 31-32 2.3.5 活性化合物分离纯化 32 2.3.6 活性化合物分离纯化 32-36 第三章 实验结果 36-51 3.1 菌种鉴定 36-38 3.1.1 形态鉴定结果 36-38 3.1.2 分子鉴定结果 38 3.2 D4115发酵产物活性检测 38-41 3.2.1 滤液各有机粗提物抗菌活性检测结果 38-39 3.2.2 菌丝粗提物各有机相抗菌活性检测结果 39-41 3.3 D4115活性代谢产物分离纯化 41-47 3.3.1 化合物LSS4的分离纯化 41-43 3.3.2 化合物LSS6的分离纯化 43-44 3.3.3 化合物LSS5的分离纯化 44-47 3.4 化合物的结构解析 47-49 3.4.1 化合物LSS4的结构解析 47-48 3.4.2 化合物LSS5的结构解析 48 3.4.3 化合物LSS6的结构解析 48-49 3.5 化合物的生物活性检测 49-51 3.5.1 化合物的抗菌活性检测 49-50 3.5.2 化合物的抗肿瘤活性检测 50-51 第四章 讨论 51-53 致谢 53-54 参考文献 54-63 附录A 63-64 附录B 64-69 附录C 69-79
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中图分类: > 农业科学 > 林业 > 林业基础科学 > 森林生物学 > 森林微生物学 > 真菌
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