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单环刺螠（Urechis unicinctus）vasa基因的发育表达图式及生殖腺的发生和发育

作　者: 王航宁
导　师: 张志峰
学　校: 中国海洋大学
专　业: 遗传学
关键词: 单环刺螠 vasa 原位杂交早期发育性腺发生性腺发育
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 34次
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内容摘要

性腺的发生是发育生物学研究的重要领域。ovasa基因在许多动物生殖系细胞中具有特异性表达,被广泛用作生殖细胞的分子标记物,在动物生殖细胞发生和生殖调控等研究中起到了重要的作用。性腺是两性生殖细胞产生和分化的场所,研究性腺发生可以更好地调控物种的繁殖性能,提高种质特性,开发和利用优异的品种资源。单环刺螠(Urechis uniconctus)是我国沿海分布的唯一无管螠目(Xenopneusta)种类,具有很高的经济食用价值,且具有潜在的净化海洋环境和药用价值,因此是一种亟待开发和利用的海洋动物资源。本文采用原位杂交技术,研究了单环刺螠Uu-vasa mRNA的发育表达特征；进一步结合组织学方法,首次揭示了单环刺螠性腺的发生以及发育中性腺的结构,为单环刺螠人工繁育提供有用的研究基础。整体原位杂交结果显示,从未受精卵到囊胚期,Uu-vasa mRNA在各期胚胎细胞中均有类似的分布特点,显示了其母源性来源的特点。原肠胚Uu-vasa mRNA集中在原肠胚内、中胚层,担轮幼虫时期信号集中在消化道,体节幼虫时阳性细胞分布于体节隔膜及消化道,在蠕虫状幼虫中,信号集中在腹刚毛附近及呼吸肠。阳性信号在呼吸肠的位置即是未来性腺发生的位置。对1-4cm幼螠进行石蜡切片,结果显示：3.5cm幼螠中,原始生殖细胞位于呼吸肠管壁外的结缔组织膜处,并数个集群与该处的体细胞共同构成性腺原基；至4cm幼螠,性腺初具雏形,其形态接近成体性腺的形态。成体单环刺螠组织切片观察发现,单环刺螠性腺位于虫体尾部呼吸肠处,为生殖细胞与结缔组织构成的薄膜状；性原细胞分布于性腺的外周,结缔组织在性腺的中部；性腺的两端通过发达的肌束分别与呼吸肠管壁外侧和体壁内侧相连。对单环刺螠性腺发育的年周期组织学观察,我们划分其性腺的发育周期为增殖期(6月末-7月和11月-次年1月)、生长期(7月末-8月下旬和2月-4月初)、成熟期(8月末-9月中旬和4月-5月初)、排放期(9月下旬-10月中旬和5月中旬-6月中旬)和休止期(10月下旬-11月初和6月中旬-6月下旬)共5个时期,对各期性腺的组织结构以及体腔液中生殖细胞组成进行了分析。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
第一章前言  11-21
  1 vasa基因的研究意义和研究进展  11-14
    1.1 vasa基因的定位  11-13
    1.2 vasa基因的表达和功能  13-14
  2 生殖腺的类型和性腺发生的研究  14-17
    2.1 生殖腺的类型  14-17
    2.2 生殖腺的发生及分化  17
  3 单环刺螠生殖生物学的研究进展  17-20
    3.1 单环刺螠的基础生物学特征  17-18
    3.2 单环刺螠生殖生物学相关研究  18-20
  4 本论文的立项依据和研究意义  20-21
第二章单环刺螠vasa基因的发育表达图式  21-32
  1 材料和方法  22-27
    1.1 实验材料  22-23
      1.1.1 实验动物  22-23
      1.1.2 工具酶、试剂盒  23
      1.1.3 主要仪器  23
    1.2 实验方法  23-27
      1.2.1 RNA探针合成和标记效率检测  23-26
      1.2.2 胚胎和幼虫整体原位杂交  26-27
  2 结果  27-29
    2.1 Uu-vasa mRNA在单环刺螠胚胎发育过程中的表达  28-29
    2.2 Uu-vasa mRNA在单环刺螠幼虫发育过程中的表达  29
  3 讨论  29-32
    3.1 Uu-vasa mRNA的发育表达特点及生殖细胞起源  29-30
    3.2 Uu-vasa mRNA可能参与单环刺螠体节组织细胞的分化  30-32
第三章单环刺螠性腺的发生、组织结构以及卵膜的形成  32-43
  1 材料与方法  32-34
    1.1 实验材料  32-33
      1.1.1 单环刺螠幼螠  33
      1.1.2 单环刺螠成体  33
      1.1.3 单环刺螠体腔卵母细胞  33
    1.2 试剂和仪器  33-34
    1.3 方法  34
      1.3.1 固定方法  34
      1.3.2 组织学方法  34
      1.3.3 电镜样本制作及观察  34
  2 结果  34-40
    2.1 单环刺螠性腺的发生  34-36
    2.2 单环刺螠性腺的结构  36-37
      2.2.1 精巢中生殖细胞的组成  37
      2.2.2 卵巢的生殖细胞的组成  37
    2.3 单环刺螠卵母细胞卵膜的形成  37-40
  3 讨论  40-43
    3.1 单环刺螠性腺的发生  40
    3.2 单环刺螠性腺的结构  40-42
    3.3 卵膜发生的初步探索  42-43
第四章单环刺螠性腺发育周期的组织学观察  43-52
  1 材料和方法  43-44
    1.1 实验材料  43-44
    1.2 试剂与仪器  44
    1.3 实验方法  44
  2 实验结果  44-50
    2.1 精巢年发育周期  45-47
      2.1.1 增殖期  45
      2.1.2 生长期  45-46
      2.1.3 成熟期  46
      2.1.4 排放期  46
      2.1.5 休止期  46-47
    2.2 卵巢年发育周期  47-50
      2.2.1 增殖期  47-48
      2.2.2 生长期  48-49
      2.2.3 成熟期  49
      2.2.4 排放期  49
      2.2.5 休止期  49-50
  3 讨论  50-52
总结  52-53
参考文献  53-58
致谢  58

单环刺螠（Urechis unicinctus）vasa基因的发育表达图式及生殖腺的发生和发育

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