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雄激素促进组织型谷氨酰胺转移酶表达与原发性开角型青光眼的发病关系的研究

作　者: 陈慧
导　师: 胡义珍
学　校: 华中科技大学
专　业: 眼科学
关键词: 组织型谷氨酰胺转移酶房角组织牛小梁网细胞原发性开角型青光眼雄激素
分类号: R775
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

[目的]:初步探讨男性开角型青光眼患者的血清及房水雄激素水平,并观察雄激素对体外培养牛眼小梁细胞(BTMG)中的组织型谷氨酰胺转移酶(tissue transglutaminase, tTG)在mRNA水平和蛋白水平表达的影响,探讨在原发性开角型青光眼(POAG)患者房角组织中tTG的表达情况,以及其与闭角型青光眼患者和正常人眼房角组织中表达的比较。初步探讨雄激素与治疗POAG发病学的关系。[方法]: 1.取患者静脉血2ml,术中取房水0.1ml用放射免疫法检测POAG患者血清及房水中睾酮( T)。与正常人对比。2.术中取青光眼患者房角组织,采用免疫组织化学染色方法观察POAG,PACG及正常人房角组织内tTG的表达情况,用RT-PCR方法分析组织内tTG的表达水平。3.高清晰彩色医学图文分析系统采集、处理图象和应用SPSS12.0软件进行统计分析4.取新生胎牛眼采用组织块培养法进行原代培养和传代培养,通过细胞形态学及免疫组化染色法进行鉴定后,取3~5代BTMC用于实验。5.用浓度0ng/l, 5ng/l,10ng/l,15ng/l,20ng/l的睾酮作用24h。6.采用RT-PCR与Western-Blot方法检测不同浓度雄激素作用前后牛眼小梁细胞tTG表达水平的变化。[结果]: 1.与正常对照组的均值比较,19例男性POAG患者血清中睾酮(T,testosterone)的均值增高,差异有显著性。房水中T的均值也增高,并且差异存在显著性。2.免疫组织化学结果显示正常组与闭角型青光眼组房角tTG的表达并无显著差异( 0.180±0.032,0.212±0.019,P>0.05 ),而正常组与开角型青光眼组、闭角型青光眼组与开角型青光眼组房角组织tTG的表达有极显著的差异性(0.180±0.032,0.325±0.052,P<0.001;0.212±0.019,0.325±0.052,P<0.05)。3.根据培养出的细胞生长特性,形态学特征及细胞外基质如纤维连接蛋白(fibronectin, Fn)、层粘连蛋白(laminin nidogen complexes, Ln)和Ⅳ型胶原蛋白(collagen type,Ⅳ)免疫组化染色阳性等确定培养的细胞为BTMC。4.从BTMC中提取总RNA后,应用特异性牛tTG引物,将其逆转录所得的cDNA经PCR扩增,得到单一的扩增产物,片段长度为433bp。经DNA测序,证实其序列与已知牛的tTG序列完全一致。5.加入不同浓度雄激素的培养液作用后,RT-PCR产物电泳结果显示正常对照组、雄激素作用组均在433bp处出现特异性的tTG基因条带,但雄激素作用组基因表达明显高于正常对照组;各组均出现212bp的基因条带为β-actin的扩增产物且表达无明显差别。激光灰度值扫描进行半定量分析后,雄激素作用组的tTG灰度值分别为(2.111±0.016)、(2.536±0.032)和(3.176±0.026),与正常对照组的灰度值(1.487±0.013)比较,均有显著性差异(P<0.05)。但正常对照组与睾酮浓度为10ng/l的两组间无差异。[结论]:开角型青光眼患者血液与房水中雄激素含量增加,性激素代谢异常可能与其发病有关。进一步实验发现雄激素睾酮可显著增加牛小梁细胞tTG的表达。开角型青光眼房角组织tTG的表达增加,tTG的增加可能与开角型青光眼的发病有关。提示雄性激素可能通过tTG作用而与POAG发病有一定关系。

全文目录

主要英文缩略词表  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-11
第一部分：原发性开角型青光眼与性激素水平  11-14
  引言  11
  材料和方法  11-12
  结果  12-13
  讨论  13-14
第二部分组织型谷氨酰胺转移酶在开角型青光眼患者房角组织的表达  14-20
  引言  14-15
  材料和方法  15-16
  实验结果  16-18
  讨论  18-20
第三部分：雄激素诱导牛眼小梁细胞TTG 的表达的研究  20-38
  引言  20
  材料和方法  20-31
  实验结果  31-35
  讨论  35-38
参考文献  38-41
综述  41-51
附表  51-52
致谢  52

雄激素促进组织型谷氨酰胺转移酶表达与原发性开角型青光眼的发病关系的研究

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