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基于生物免疫传感器建立金黄色葡萄球菌快速检测方法的初步研究

作　者: 姜苏娟
导　师: 韩璐
学　校: 大连医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: 生物免疫传感器检测金黄色葡萄球菌
分类号: R446.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:本研究将以色素体Chromatophores和F0F1-ATP合酶为工具,结合荧光技术研究一种生物免疫传感器,初步建立灵敏、快速、低成本检测金黄色葡萄球菌的方法,为妇产科临床感染病的诊断提供新技术。方法:将培养的嗜热菌超声破碎获得带有F0F1-ATP酶色素体,pH变化敏感的荧光物质F1300标记到F0F1-ATP酶的载体色素体的内表面,然后在F0F1-ATP酶上连接β亚基抗体-生物素-链亲和素-生物素-金葡菌菌抗体复合体,得到可以捕获金黄色葡球菌的免疫生物传感器。传感器上负载菌量不同,引起的酶活性变化不同,酶活性变化又引起色素体内pH变化,最后通过F1300的荧光强度变化来检测菌量。实验数据应用SPSS10.0系统统计分析软件进行处理。结果:1.提取的chromatophores平均直径约为70nm,其水溶液中测得在860 nm的标志峰。2.F1300-ch上负载的F0F1-ATP酶水解活性为42.56μmol/mg?min。3.F1300荧光强度变化与ATP合成过程的H+转运,即与F0F1-ATP酶的活性密切相关。4.F0F1-ATP酶的β亚基结合上不同的负载,对F0F1-ATP酶驱动的质子转运的活性变化的影响,可以通过监测F1300的荧光强度得以反映。5.建立菌液浓度与荧光值的相关性曲线。随着浓度增加,荧光值逐渐下降。在103-105CFU/ml呈现良好的梯度关系。6.生物免疫传感器检测金黄色葡萄球菌的全过程仅需4.5小时。结论:本研究将以色素体Chromatophores为工具,利用F0F1-ATP合酶的旋转特性、质子转运特性和负载越大活性越小特性,结合荧光探针F1300标记技术研究将它作为生物免疫传感器,建立一种灵敏、快速、低成本检测金黄色葡萄球菌的全新方法,并确立了金黄色葡萄球菌标准菌株的菌液浓度-荧光值量效曲线。

基于生物免疫传感器建立金黄色葡萄球菌快速检测方法的初步研究

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