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脂肪细胞培养上清增加肝细胞糖原合成的机制研究

作　者: 余莹
导　师: 韩晓
学　校: 南京医科大学
专　业: 生物化学和分子生物学
关键词: 脂肪细胞共培养原代肝细胞糖原合成胰岛素敏感性
分类号: R589.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的:探讨分化的3T3L1脂肪细胞培养上清及未分化的3T3L1前脂肪细胞培养上清对肝细胞胰岛素信号通路、糖原合成的影响及其作用机制。方法:诱导3T3L1细胞分化成为脂肪细胞,收取分化及未分化的3T3L1细胞培养上清;用该上清分别培养小鼠原代肝细胞和HepG2细胞24小时,利用糖原染色方法(PAS染色)检测肝细胞的糖原合成功能;通过Western blot检测上述细胞胰岛素信号通路分子磷酸化水平的改变,选取磷酸化的IRS-2和Akt作为检测指标;通过流式细胞术检测细胞在上清培养后的周期变化;观察上清培养0-2小时对细胞Akt磷酸化水平的影响及加入炎症因子TNF-α后Akt磷酸化水平的改变。结果:与分化的3T3L1脂肪细胞及未分化的3T3L1细胞培养上清共培养24小时,小鼠原代肝细胞和HepG2肝癌细胞糖原合成较对照增加,同时,IRS-2(Tyr612)磷酸化水平和Akt(Ser473)磷酸化水平上调。0-2小时共培养使原代小鼠肝细胞及HepG2肝癌细胞Akt(Ser473)磷酸化水平在15分钟明显上升,30分钟达到最高,1小时后下降,2小时恢复正常水平;在脂肪细胞及3T3L1前脂肪细胞培养上清处理的同时,外源性加入10ng/ml TNF-α处理,Akt(Ser473)的磷酸化水平降到正常水平。结论:脂肪细胞及前脂肪细胞的培养上清能够促进肝细胞合成糖原,上调肝细胞IRS-2(Tyr612)、Akt(Ser473)的磷酸化水平。脂肪细胞及前脂肪细胞的培养上清培养30分钟明显上调Akt(Ser473)磷酸化水平,该作用可以被TNF-α所中和。这一结果提示在未受刺激的脂肪细胞、3T3L1前脂肪细胞,其全分泌物总的功能是增加肝细胞胰岛素敏感性的;脂肪细胞上清中可能存在某些增加胰岛素敏感性的物质,并且这种作用可以被TNF-α所抑制。

全文目录

目录  2-3
英文缩写注释  3-4
中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
前言  8-14
  1 肝脏胰岛素抵杭  8-10
  2 脂肪细胞因子  10
  3 脂肪细胞因子与肝脏胰岛素抵杭的关系  10-12
  4 选题背景及研究内容  12-14
材料与方法  14-22
  材料  14
  方法  14-22
结果  22-30
  1 诱导3T3L1细胞分化为脂肪细胞  22
  2 小鼠原代肝细胞的分离纯化  22-25
  3 FS、TS对肝细胞糖原合成的影响  25
  4 FS和TS对肝细胞胰岛素敏感性的影响  25-26
  5 FS和TS促进肝细胞Akt活化  26-27
  6 FS促进肝细胞Akt活化的作用可被TNF-α抑制  27-28
  7 FS和TS对HepG2周期的影响  28-30
分析与讨论  30-33
小结  33-35
参考文献  35-41
附录  41-44
致谢  44-45
综述  45-60
  脂肪细胞因子与肝细胞胰岛素抵抗  45-60

脂肪细胞培养上清增加肝细胞糖原合成的机制研究

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