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对TGF-β不敏感肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的培养及其在前列腺癌免疫治疗中的应用

作　者: 曹现祥
导　师: 赵耀瑞；徐勇；张志宏
学　校: 天津医科大学
专　业: 外科学
关键词: 前列腺癌细胞毒性T淋巴细胞转化生长因子β 免疫治疗树突状细胞
分类号: R737.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)是体内抗肿瘤免疫最为有效的效应细胞,但其激活需要抗原呈递细胞(APC)处理并呈递相应的抗原。树突状细胞(DC)是目前已知功能最强的APC,可以激活初始T细胞和记忆性T细胞。DC可提供T细胞活化所需的共刺激信号,在体内外诱导CTL的生成。肿瘤组织匀浆、细胞裂解物包含全部抗原信息,用其致敏DC细胞,体外可以激发T细胞大量增殖,产生肿瘤特异性CTL。转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)是肿瘤细胞分泌的功能最强的免疫抑制因子。TGF-β具有通过抑制肿瘤抗原呈递、淋巴细胞的杀伤作用等多种途径,负性调节机体对肿瘤的免疫应答和促进肿瘤生长的作用。我们通过用携带显性负相的TGF-βⅡ型受体基因的慢病毒载体感染人CTL,使其对TGF-β不敏感,为晚期前列腺癌的治疗探索一条新的治疗途径。方法我们用同一患者来源的DC、肿瘤组织匀浆、T淋巴细胞培养出肿瘤特异性CTL,然后以慢病毒为载体将TβRⅡ-DNglytk基因转染到肿瘤特异性CTL,从而去除了TGF-β对肿瘤特异性CTL的抑制作用。我们先用PC-3肿瘤细胞裂解物致敏健康人来源DC,体外刺激T淋巴细胞,获得对TGF-β不敏感肿瘤特异性CTL,并且通过流式细胞术,荧光抗体染色,Western—blot,MTT等方法对其进行了分析、鉴定。在此基础之上,我们将前列腺根治性切除术后标本移植到裸鼠身上,进行扩增,获得足量的肿瘤组织,用肿瘤组织匀浆作用于同一患者来源DC,然后刺激T淋巴细胞,成功获得了对TGF-β不敏感肿瘤特异性CTL,并经体内实验证实了对TGF-β不敏感肿瘤特异性CTL的有效性。结果本实验采用人重组IL-4、人重组GM-CSF、PC-3肿瘤细胞裂解物体外诱导PBMC成功培养出负载肿瘤抗原的DC细胞,以此致敏T淋巴细胞,获得肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞;成功将TβRⅡDNglytk基因转入肿瘤特异性CTL细胞,并获得鉴定;转染对细胞状态、活性影响很小;体内、外实验验证转染后一定程度上去除了TGF-β对CTL杀伤肿瘤细胞的抑制。结论对TGF-β不敏感肿瘤特异性CTL培养成功及其体内、外实验研究表明:这一方法在肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用前景,为肿瘤的过继免疫治疗提供了又一新的思路。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
符号说明  9-11
前言  11-13
  研究现状  11-12
  研究目的、方法  12-13
对TGF-β不敏感肿瘤特异性CTL的培养及其在前列腺癌免疫治疗中的应用  13-64
  材料和方法  13-30
  结果  30-35
  附图表  35-51
  讨论  51-64
结论  64-65
参考文献  65-71
综述  71-79
  细胞毒性T淋巴细胞和前列腺癌免疫治疗的研究进展  71-76
  综述参考文献  76-79
致谢  79

对TGF-β不敏感肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的培养及其在前列腺癌免疫治疗中的应用

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