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籽鹅卵巢组织全长cDNA文库的构建及部分克隆序列分析

作　者: 董重阳
导　师: 杨焕民
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 籽鹅卵巢 cDNA文库
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 18次
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内容摘要

为克隆鹅产蛋性能相关基因,从而深入研究鹅产蛋的分子机理,以籽鹅卵巢组织为实验材料,用Trizol方法提取北方籽鹅卵巢组织总RNA并纯化mRNA,经反转录成单链cDNA,长距离PCR方法合成双链产物;PCR产物经蛋白酶K水解后,用SfilⅠ酶切,将酶切产物进行分级分离,回收400bp以上的组分,并与λTriplEx2载体连接,连接产物经体外蛋白包装,产生原始文库。随机挑取10个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行扩增,以检测所构建的文库的质量。将文库的λTriplEx2噬菌体载体转化到pTriplEx2质粒载体,随机挑取198个克隆,用T7和SP6通用引物进行PCR鉴定,选取750bp以上的基因120个测序。取得结果如下:1.利用λTriplEx2噬菌体构建了籽鹅卵巢组织cDNA文库,并对文库质量进行鉴定结果显示,该文库的初始滴度为3.1×106 pfu/mL,重组率为94%,插入片段长度为0.5～2.5 kb。结果表明,成功构建籽鹅卵巢组织cDNA文库。2.随机挑取120个克隆测序,测序成功109个,去掉冗余序列后共有45个,测定的cDNA序列与BLASTn进行比对,其中34个中大部分与鸡具有较高的同源性可认定为已知序列EST,其中有一个为鹅的相关序列,为β-actin mRNA;一个为灰雁的相关序列,为MHC基因,而另外11个同源性低,可认定为未知序列。此文库的构建,具有代表性,不仅保存了北方籽鹅卵巢的基因资源,而且对于北方籽鹅中有明确功能的特异基因的克隆、表达以及新基因的克隆与功能研究奠定了物质基础,并能为籽鹅的产蛋性能的研究奠定基础。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
第一章文献综述  7-19
  1.1 鹅类简介  8-11
  1.2 我国籽鹅类简介  11
  1.3 CDNA 文库  11-15
  1.4 表达序列标签（ESTS）及其应用  15-19
第二章籽鹅卵巢组织全长CDNA 文库的构建及部分序列分析  19-29
  2.1 材料  19-20
  2.2 方法  20-29
第三章结果与分析  29-34
  3.1 籽鹅卵巢总RNA 的提取与MRNA 的纯化  29
  3.2 CDNA 第一链和第二链的合成  29
  3.3 双链DNA 的酶切、分级分离  29-30
  3.4 文库质量鉴定  30-31
  3.5 转化后质粒PCR 鉴定  31-32
  3.6 文库中序列分析  32-34
第四章讨论  34-37
  4.1 提高RNA 代表性和完整性的措施  34
  4.2 文库的构建  34-36
  4.3 序列的分析  36
  4.4 本研究的创新点  36-37
参考文献  37-40
附录  40-45
致谢  45-46
作者简历  46

籽鹅卵巢组织全长cDNA文库的构建及部分克隆序列分析

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