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丝裂霉素对HUVEC迁移能力的影响并机制初探

作　者: 付莹
导　师: 李卫平
学　校: 大连医科大学
专　业: 药理学
关键词: 丝裂霉素人脐静脉血管内皮细胞水通道蛋白-1 凋亡
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：观察丝裂霉素对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)作用的选择性和细胞迁移能力的影响及机制研究。方法：1.丝裂霉素对HUVEC作用的选择性。以人肝癌SMMC-7721细胞(7721)为对照,将不同剂量丝裂霉素与细胞共培养,MTT法测定细胞存活率。以半数抑制浓度(IC50)为作用选择性指标,衡量丝裂霉素对HUVEC作用的选择性。2.丝裂霉素对HUVEC凋亡的影响。分别以不同剂量的丝裂霉素与细胞共培养48小时后,固定。采用HE染色观察药物对细胞形态学的影响;吖啶橙/溴化乙锭(AO:EB)双荧光染色法观察药物对HUVEC凋亡的影响。3.丝裂霉素对HUVEC迁移能力的影响。采用Transwell小室(Boyden Chamber Transwell)法将细胞与不同剂量药物共培养8小时,固定、染色,观察细胞移行能力。4.丝裂霉素对HUVEC水通道蛋白-1(aquaporin 1, AQP1)表达的影响。将细胞与不同剂量的丝裂霉素共培养48小时后,分别采用免疫细胞化学方法和Western-Blot法测定药物对HUVEC AQP1表达的影响。结果：1. HUVEC与药物共培养24、48、72小时后存活率浓度依赖性地降低(P<0.01)。不同培养时间的IC50 (34.74μg/ml、1.79μg/ml、2.03μg/ml)明显低于7721对照细胞(379.05μg/ml、11.12μg/ml、5.21μg/ml, P<0.01)。2.HE染色显示不同剂量的丝裂霉素处理HUVEC出现程度不等的体积缩小、细胞核固缩、深染等细胞损伤形态学改变。AO:EB双荧光染色显示,应用不同剂量的丝裂霉素处理48小时,实验组细胞凋亡率(24.6%、47.4%、89.1%)较空白对照组(7.5%)增加显著(P<0.01),各剂量组间亦有明显差异,显示剂量相关性(P<0.01)。3. Boyden Chamber Transwell法研究结果显示,在未对细胞存活率产生影响的基础上,不同剂量(0.09μg/ml、0.03μg/ml、0.01μg/ml)丝裂霉素可降低HUVEC迁移率(75.1%、49.5%、18.4%),与正常对照组比较差异显著(P<0.01)。4.免疫细胞化学法及Western Blot分析法研究均显示丝裂霉素可剂量依赖性降低HUVEC AQP1的表达(阳性细胞表达率68.18%、54.21%、49.11%；相对蛋白表达3.04、2.68、1.25)与对照组(阳性细胞表达率89.76%；相对蛋白表达4.32)比较差异显著(P<0.01)。结论：1.丝裂霉素对体外培养的HUVEC存活率有明显的、浓度依赖性的抑制作用,与对照细胞7721相比选择性高。2.丝裂霉素抑制HUVEC存活率与促进其凋亡有关。3.在低剂量不影响HUVEC存活率的情况下丝裂霉素抑制细胞的移行。4.丝裂霉素促进细胞凋亡及抗迁移作用的机制可能与其降低HUVEC AQP1表达有关。

全文目录

一、摘要  5-9
  (一) 中文摘要  5-7
  (二) 英文摘要  7-9
二、文献综述  9-18
  (一) 综述  9-14
  (二) 参考文献  14-18
三、正文  18-37
  (一) 前言  18-19
  (二) 材料和方法  19-23
  (三) 结果  23-30
  (四) 讨论  30-33
  (五) 结论  33-34
  (六) 参考文献  34-37
四、致谢  37-38

丝裂霉素对HUVEC迁移能力的影响并机制初探

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