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雷公藤胚状体培养合成次生代谢产物初步研究

作　者: 杨广隶
导　师: 张兴
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 农药学
关键词: 雷公藤组织培养胚状体雷公藤甲素雷公藤总生物碱
分类号: S482.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 66次
引　用: 2次
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内容摘要

雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook. f.)是一种重要的药用植物和具有杀虫活性的植物,现代药理研究表明雷公藤具有抗风湿、抗菌、抗癌、抗艾滋等多种功效。在农用活性研究方面发现其对农业害虫有明显的毒杀作用,可引起拒食反应,或抑制害虫的生长发育。近年来在医用及生物农药方面对雷公藤的需求急剧增加,进而引起对雷公藤野生资源盲目的开采,使得野生雷公藤资源急剧减少并给环境带来巨大压力。因此,为保护野生雷公藤资源,维护生态环境,实现雷公藤自然资源的可持续发展和满足市场的需求,通过组织培养的方式来生产雷公藤的有用次生代谢产物具有重要的实际应用价值。本研究以采自福建泰宁地区的一年生枝条扦插形成的雷公藤叶为外植体诱导形成愈伤组织,通过对愈伤组织悬浮细胞的诱导,形成胚状体稳定的培养体系,探讨培养基、不同成分、培养条件、诱导子对胚状体的生长、雷公藤甲素及雷公藤总生物碱含量的影响。主要研究结果如下:(1)胚状体的诱导及悬浮培养体系的建立:愈伤组织在1/2MS附加60 mL/L椰汁的液体培养基中可诱导形成初为淡黄色,后为浅绿色的胚状体,将脱离母体的胚状体转移至1/2MS附加0.5 mg/LNAA的液体培养基中,胚状体可继续增殖分化,将胚状体转移至无激素的MS固体培养基中,可再生为雷公藤植株,炼苗后移栽至温室土壤中,成活率高达60%。(2)胚状体培养体系优化:经过对雷公藤胚状体悬浮培养体系接种量、培养基、pH值等培养条件的筛选,获得较好的培养条件:基本培养基为1/2MS+1.0 mg/LNAA+30 g/L蔗糖,接种量为1.5 g/100mL, pH值为5.8,装液量为120 mL每250 mL三角瓶;以生物量为指标通过内生真菌诱导子的添加获得两个较好的培养体系,其中1/2MS+0.5 mg/ L NAA+30 g/L蔗糖+Y1,pH 5.8培养条件下获得的胚状体中雷公藤甲素的含量是叶的1.07倍,是自然根皮粉中的1.44倍;在1/2MS+0.5 mg/ L NAA+30g/L蔗糖+G4,pH 5.8培养条件培养的胚状体中总生物碱是叶的17.02倍,是自然根皮粉中的1.46倍。(3)胚状体提取物的生物活性研究:胚状体提取物对3龄小菜蛾的毒杀作用与根皮粉相当,处理72h后死亡率达90%以上;对多种植物病原真菌的菌丝生长也具有一定的抑制效果,特别是对番茄灰霉病菌、棉花立枯病菌、茄子黄萎病菌,对其菌丝生长抑制率均达到50%以上。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-11
第一章文献综述  11-16
  1.1 雷公藤的研究现状  11-13
    1.1.1 雷公藤资源分布情况及生物学特性  11
    1.1.2 雷公藤的主要化学成分及药理药效研究  11-12
    1.1.3 雷公藤的杀虫作用研究概况  12-13
    1.1.4 雷公藤组织培养生产次生代谢产物研究进展  13
  1.2 植物胚状体培养研究现状  13-14
    1.2.1 植物胚状体发生机理的研究  14
    1.2.2 植物胚状体发生机理的分子基础  14
    1.2.3 植物胚状体发生的影响因素  14
  1.3 选题的依据及研究思路  14-16
第二章雷公藤胚状体诱导及悬浮体系的建立与优化  16-24
  2.1 试验材料  16
  2.2 试验方法  16-17
    2.2.1 雷公藤胚状体的诱导及稳定性培养  16
    2.2.2 雷公藤胚状体悬浮培养条件优化  16-17
    2.2.3 雷公藤胚状体放大培养  17
  2.3 结果与分析  17-22
    2.3.1 雷公藤胚状体的诱导及稳定性培养  17-18
    2.3.2 雷公藤胚状体悬浮培养条件优化  18-22
    2.3.3 雷公藤胚状体放大培养  22
  2.4 小结与讨论  22-24
第三章雷公藤胚状体中雷公藤甲素和总生物碱含量测定  24-29
  3.1 材料与试剂  24
  3.2 试验方法  24-25
    3.2.1 雷公藤甲素和总生物碱的提取  24
    3.2.2 雷公藤甲素和总生物碱的测定  24-25
  3.3 结果与分析  25-27
    3.3.1 雷公藤甲素和总生物碱的标准曲线  25-26
    3.3.2 雷公藤甲素标和总生物碱的线性关系考察  26-27
    3.3.3 不同胚状体的生物量及雷公藤甲素和总生物碱含量  27
  3.4 小结与讨论  27-29
第四章雷公藤胚状体提取物生物活性研究  29-32
  4.1 试验材料  29
  4.2 试验方法  29
    4.2.1 雷公藤提取物对小菜蛾幼虫的毒杀作用  29
    4.2.2 胚状体提取物对植物病原真菌菌丝生长的抑制作用  29
  4.3 结果与分析  29-31
  4.4 小结与讨论  31-32
第五章结论  32-33
参考文献  33-38
附图  38-41
致谢  41-42
作者简介  42

雷公藤胚状体培养合成次生代谢产物初步研究

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