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重组纳豆激酶在毕赤酵母中表达及大规模发酵研究

作　者: 闫少华
导　师: 颜炜群
学　校: 吉林大学
专　业: 生物医学工程
关键词: 重组纳豆激酶毕赤酵母表达大规模发酵
分类号: TQ464.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

纳豆激酶(Nattokinase, NK)是一种碱性丝氨酸蛋白酶,能显著地溶解体内外的血栓,它由纳豆枯草杆菌(Bacillus subtilis var.natto)产生,最早从纳豆中分离得到。国内外大量研究证实了纳豆激酶的医用价值,但由于获取成本过高,所以应用基因工程途径获取纳豆激酶是近年来的研究热点。本研究从纳豆芽孢杆菌中,利用PCR技术扩增并获取了纳豆激酶基因,构建了表达载体pPICZaC-NK,建立了重组NK毕赤酵母真核表达系统。通过对产物进行SDS-PAGE分析和四肽底物法活性分析,筛选获得了高表达纳豆激酶的毕赤酵母菌株,并对其最佳发酵条件进行初步探索,明确了发酵时间以及不同pH等对其发酵的影响,进行了大规模发酵纯化工艺研究,为重组纳豆激酶的工业化生产奠定了基础。

全文目录

提要  4-6
英文缩略词  6-8
第1章前言  8-22
  1.1 纳豆和纳豆芽孢杆菌  8-9
  1.2 纳豆激酶  9-14
  1.3 纳豆激酶的发酵工艺研究  14-16
  1.4 纳豆激酶的基因工程研究进展  16-20
  1.5 课题设计思路  20-22
第2章重组pPICZaC-NK表达载体的构建  22-35
  2.1 实验材料  22-24
  2.2 方法  24-31
  2.3 结果  31-35
第3章纳豆激酶在毕赤酵母中表达的研究  35-52
  3.1 实验材料  35-38
  3.2 方法  38-44
  3.3 结果  44-49
  3.4 讨论  49-52
第4章结论  52-53
参考文献  53-59
附录  59-61
摘要  61-63
Abstract  63-65
致谢  65

重组纳豆激酶在毕赤酵母中表达及大规模发酵研究

内容摘要

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