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紫黄散对法氏囊病雏鸡免疫调节的影响

作 者: 徐建忠
导 师: 钟秀会;史秋梅;倪耀娣
学 校: 河北农业大学
专 业: 临床兽医学
关键词: 紫黄散 传染性法氏囊病毒 免疫调节剂 CD4+ CD8+
分类号: S858.31
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
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内容摘要


紫锥菊提取物作为一种天然的植物药在欧洲和北美广泛使用,用于预防感冒,治疗咳嗽、支气管炎和上呼吸道感染。紫锥菊属的主要活性成分是多糖、糖蛋白、咖啡酸衍生物和烷基酰胺类。具有免疫活性的菊苣酸是紫锥菊制品质量控制的主要标准之一,紫锥菊可通过刺激机体的免疫系统而增强机体对细菌和病毒感染的抵抗力,具有抗生素样作用。黄芪是应用范围很广的中药材。现代药理研究表明,已应用多年的黄芪具有免疫刺激、抗病毒、抗氧化和抗肿瘤的作用。在黄芪中,黄芪多糖和黄芪皂甙被认为是具有生物活性的两种物质。黄芪多糖具有免疫调节效果而且无副作用的产生。目的:紫锥菊和黄芪均具有增强机体的细胞免疫和体液免疫,抗细菌和抗病毒的作用,符合中药相须的配伍原则,基于此我们设计了中药组方——紫黄散。笔者将紫黄散用于人工感染传染性法氏囊病的雏鸡,测定血液生化指标的变化以及雏鸡免疫器官内CD4+CD8+的量的变化来反映紫黄散对法氏囊病雏鸡的预防治疗效果,阐述其药用机理,为紫黄散在畜牧业生产中的应用提供理论依据。方法:采用单因子完全随机试验设计。将240只1日龄雏鸡适应饲养6d后,随机分为6个处理,分别用A、B、C、D、E、F表示。在14日龄时A、B和C组按高(C:90mg/ml·kg)、中(C:45 mg/ml·kg)、低(C:4.5 mg/ml·kg)三个剂量灌服紫黄散,D、E和F组灌服生理盐水,每只鸡1ml,连续灌服7d,其中F组作为空白对照组,隔离饲养。在21日龄时对A~E组进行攻毒,每只点眼0.2ml传代毒液,F组0.2ml生理盐水,临床症状以法氏囊发生病变和胸肌、腿肌出血为准。攻毒3d后,阳性对照D组每只鸡肌注卵黄抗体0.5ml,其他各组注射0.5ml生理盐水。Ⅰ:观察攻毒前、后鸡只的临床症状,每天记录各组的死亡数,最后统计死亡率。Ⅱ:雏鸡饲养至试验的第24、28、40和42d,从各试验组中随机取10只分别无菌采集血液经离心机3000r/min离心,取其血清,-20℃保存,用于血液生化检测血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)。Ⅲ:免疫组化染色法检测CD4+、CD8+T细胞的分布情况。应用Motic 3.0病理图像分析系统分析以上样品的胸腺和小肠中表达的CD4+、CD8+阳性物质面积所占比率。结果:紫黄散能明显降低IBD雏鸡死亡率,B组与E组相比死亡率降低15.6%;用药B组免疫器官指数有显著(P<0.05)提高,部分时间点与E组差异极显著(P<0.01)。外周血液内蛋白含量和酶的活性,B组与F组相比差异有减小的趋势。外周及中枢免疫器官内CD4+、CD8+的显著增加(P<0.05)。结论:紫黄散能显著缓解IBD的临床症状,明显降低IBD雏鸡的死亡率;不同剂量的紫黄散可提高对IBD雏鸡的免疫器官指数,显著降低法氏囊病导致的体内代谢紊乱,增强了外周血液内蛋白含量和酶的活性,降低IBDV对雏鸡机体造成的免疫抑制。外周及中枢免疫器官内CD4+、CD8+阳性表达增加,表明紫黄散对IBD雏鸡的免疫抑制有显著的调节作用,以紫黄散给药剂量为45 mg/ml·kg效果最优。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-10
1 引言  10-17
2 材料和方法  17-23
  2.1 试验动物  17
  2.2 药品及试剂  17-18
  2.3 主要仪器设备  18
  2.4 病毒的传代  18-19
  2.5 法氏囊病雏鸡病理模型的制造  19-20
    2.5.1 试验动物分组  19
    2.5.2 对流免疫电泳  19-20
    2.5.3 法氏囊病理模型建立效果检测  20
    2.5.4 死亡率记录  20
  2.6 血液生化指标测定和免疫器官的采集  20
  2.7 免疫组化法测定IBD 雏鸡胸腺、小肠中CD4+CD8+T 淋巴细胞的动态变化  20-22
    2.7.1 动物分组及处理  20-21
    2.7.2 冰冻切片制作及保存  21
    2.7.3 免疫组织化学染色及结果判定  21-22
  2.8 数据处理  22-23
3 结果  23-30
  3.1 法氏囊病理模型检验结果  23
  3.2 紫黄散对法氏囊病雏鸡发病率和死亡率的影响  23-24
  3.3 紫黄散对免疫器官指数测定结果  24-25
    3.3.1 法氏囊指数差异  24
    3.3.2 脾脏指数差异  24-25
    3.3.3 胸腺指数差异  25
  3.4 紫黄散对雏鸡血清转氨酶活性的变化  25-27
  3.5 紫黄散对IBD 雏鸡血清蛋白含量测定结果  27-28
  3.6 紫黄散对IBD 雏鸡胸腺、小肠中CD4+、CD8+T 淋巴细胞阳性面积系数的影响  28-30
    3.6.1 胸腺中CD4+、CD8+T 淋巴细胞阳性面积系数的变化  28-29
    3.6.2 小肠中CD4+、CD8+T 淋巴细胞阳性面积系数的变化  29-30
4 讨论  30-34
  4.1 紫黄散对免疫器官指数的影响  30-31
  4.2 紫黄散对血液生化指标的影响  31-32
  4.3 紫黄散对胸腺、小肠中CD4+、CD8+T 淋巴细胞的影响  32-34
5 结论  34-35
参考文献  35-40
附录  40-42
在读期间发表的学术论文  42-43
作者简历  43-44
致谢  44-45

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