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EV71不同毒株在不同温度条件下的增殖动力学研究

作　者: 刘云霞
导　师: 李琦涵；刘龙丁；董承红
学　校: 昆明医学院
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: EV71温度增殖动力学
分类号: Q939.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

EV71是小RNA病毒科肠道病毒属的成员。1969年在美国首次被分离后,在世界各地都不断有报道。EV71在世界范围内广泛分布,没有地域性。多流行于夏秋季节,但全年均可发生。人是EV71唯一的自然宿主,通过人群间的密切接触,经呼吸道、消化道和接触病毒分泌物的途径传播。EV71感染在多数情况为隐性感染,也可表现为手足口病和疱疹性咽峡炎,患者以小儿居多。由于EV71亦具有嗜神经系统特性,因此其感染还可导致中枢神经系统疾病,并留下较严重的后遗症或导致死亡。因此,EV71所导致的感染流行,具有很重要的公共卫生意义。由于目前尚无针对EV71感染的特异性治疗药物,开发相关的疫苗对于手足口病的防治具有重要意义。EV71可以分A、B、C三种基因型,共有十种以上的基因亚型。EV71的基因型与病毒的分离时间和流行地区有一定的关系,但和感染导致的临床症状没有必然联系。中国大陆自1999年起,流行的EV71均为C4亚型。EV71复制周期大约12个小时,复制周期与温度、pH、宿主细胞、感染的多样性等因素相关；EV71的复制周期包括吸附、脱壳、进入、RNA合成和复制、蛋白合成、颗粒组装和释放等步骤。病毒首先组装成没有感染性的原病毒颗粒,在VP0被裂解为VP2、VP4后形成具有感染性的成熟病毒颗粒。EV71病毒的治病过程可分为3个阶段,初期：病毒在咽粘膜和扁桃体中繁殖扩增；中期：病毒进入血液循环,形成病毒血症,进一步在网状内皮细胞中扩增；后期：通过血液侵犯包括皮肤黏膜和中枢神经系统在内的多种器官和组织,引起疱疹性咽峡炎、无菌性脑膜炎等一些病理性变化。本研究的目的是认识温度对EV71在组织培养细胞(Vero)中的增殖动力的影响。选取分离于中国大陆不同地区的三个EV71流行毒株,分别在32℃、35℃、37℃和40℃四个温度培养,微量滴定法测定子代感染性滴度,绘制病毒生长曲线；分别在32℃、35℃、37℃和40℃四个温度进行病毒噬斑形成实验；及收集分别在32℃、35℃、37℃、40℃四个温度培养收获的子代病毒在37℃进行噬斑实验；动物致病性实验,在新生ICR乳鼠颅内注射接种分别于32℃、35℃、37℃和40℃四个温度培养收集的病毒。实验结果表明：EV71在35℃和37℃时致相同数量Vero细胞完全病变所需时间最短,在35℃时致相同数量Vero细胞完全病变收获的子代病毒感染性滴度最高。37℃时病毒在感染24小时后获得了感染性滴度最高的子代病毒,感染24小时37℃培养的病毒表现出最高的增殖速率,35℃时次之,40℃时病毒的增殖速率最低。35℃时由于病毒增殖的指数期时间的延长,病毒的增殖在达到了较37℃时更高水平的增殖平衡后才进入平台期,决定了病毒增殖进入平台期后,35℃条件下收获的病毒滴度最高。在病毒噬斑培养和新生乳鼠的颅内注射病毒感染的实验中,各温度培养的病毒没有表现出明显差异的实验结果。这提示了在不同温度下,EV71在Vero细胞中增殖一代并不会对病毒侵蚀细胞的噬斑形态,及对实验动物(ICR乳鼠)的致死率产生有意义的影响。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
引言  9-17
一、实验材料和方法  17-23
  (一) 实验材料  17-18
  (二) 实验方法  18-23
二、结果和分析  23-34
  (一) FY23、K9、S1三株病毒在Vero细胞上的适应生长  23
  (二) FY23、K9、S1三株病毒在Vero细胞上中和鉴别试验结果  23
  (三) FY23、K9、S1三株病毒测序分析结果  23-25
  (四) EV71在不同温度致细胞完全病变的比较试验  25-27
  (五) EV71在不同温度的增殖动力实验  27-28
  (六) EV71在不同温度的噬斑形成实验  28-30
  (七) EV71不同温度收获病毒的噬斑形成实验  30-32
  (八) EV71不同温度收获病毒感染动物实验  32-34
三、讨论  34-38
四、小结  38-39
参考文献  39-42
附录  42-45
论文综述  45-56
致谢  56-57
研究生简历  57

EV71不同毒株在不同温度条件下的增殖动力学研究

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