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超声联合微泡开放血—前列腺屏障的研究

作　者: 刘观成
导　师: 柳建华
学　校: 广州医学院
专　业: 超声医学
关键词: 血-前列腺屏障超声波超声造影剂空化效应
分类号: R697.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

研究背景:前列腺疾病是男性临床多发病,发病率呈逐年上升的趋势。据报道,50岁以上的男性人群中,约70%男性患有各种前列腺疾病,包括前列腺炎、前列腺增生及前列腺癌。临床实践及科学研究均提示前列腺组织具有一定的生物屏障结构,一方面隔绝外来有害物质对前列腺的损害,另一方面,也阻挡了药物进入前列腺组织。目前认为,前列腺腺体组织的纤维肌性间质层、腺泡上皮脂质层等构成了前列腺的屏障结构,加之血管分布在前列腺纤维间质外侧的特殊解剖结构,药物难以通过此屏障达到治疗前列腺疾病的有效浓度。在慢性前列腺炎的情况下,由于前列腺囊胞周围纤维化、脓腔周围组织纤维化及纤维间质明显增生,其屏障作用更为突出。在药物选择上,水溶性、酸性、解离常数低及蛋白结合率高的抗菌药物均不易透过血-前列腺屏障,因此在前列腺疾病的用药上受到很大的限制,且疗效欠佳,给庞大的患者人群和公共卫生事业造成了极大的经济负担。因此,如何提高前列腺组织通透性,探索新的药物治疗途径是目前前列腺疾病治疗的研究重点。研究目的:1、采用第三军医大学附属新桥医院超声科自行研发的新型脉冲式超声治疗仪,应用单纯微泡、单纯超声辐照及超声联合造影剂微泡辐照的方法对40只新西兰兔前列腺进行治疗,切片HE染色光学显微镜下检测治疗后兔前列腺腺体组织及细胞的病理改变;使用透射式电子显微镜观察各组前列腺细胞及细胞间连接结构的超微变化。2、以伊文思蓝为示踪剂,通过荧光显微镜观察治疗后各组伊文思蓝溶液漏出在前列腺组织分布的差异;制作伊文思蓝定量标准曲线及回归方程定量分析各组前列腺组织治疗后的伊文思蓝浓度以反映前列腺经不同处理后通透性的差别。3、TUNEL法观察各实验方法对于兔前列腺腺体上皮细胞凋亡表达水平的影响。材料与方法:40只健康8月龄性成熟新西兰大白兔,随机分为2大组,每组各20只。1.第1大组依方法一处理,分别分为单纯超声组(US)、单纯微泡组(MB)、超声联合微泡辐照组(US+MB)及空白对照组(CO)。开腹充分暴露前列腺前方的精囊,经耳缘静脉注射2%伊文思蓝(EB)后,注射微泡造影剂,同时经精囊辐照其后方的兔前列腺10分钟,US组仅作单纯超声辐照10分钟,MB组只注射5mL“脂氟显”微泡悬液,CO组仅注射生理盐水5mL。术后经腹主动脉灌注,取前列腺并作冰冻切片,荧光显微镜观察EB在前列腺组织中的渗漏;检测EB甲酰胺溶液的最大吸收峰值并测量梯度浓度EB溶液的光密度值回归出EB-光密度值曲线及回归方程,以3mL甲酰胺溶液萃取出实验兔前列腺组织中的EB并测量其光密度值(OD),代入回归方程求得EB漏出总量及前列腺组织中EB浓度。2.第2大组按方法二处理,分组、治疗同上法,但不注射伊文思蓝及肝素化生理盐水灌注。术后取前列腺切片作HE染色、透射式电子显微镜观察超声及超声联合微泡及单纯微泡对兔前列腺的超微结构的影响;前列腺标本作TUNEL染色并统计各组前列腺细胞凋亡指数(AI)以考察其对前列腺细胞凋亡表达水平的影响。结果:US组、MB组、US+MB组及CO组前列腺冰冻切片内均可发现红色EB荧光分布;经苏木素复染后可见US+MB组部分腺腔内出现红色EB荧光,而US、MB及CO组红色荧光仅分布于前列腺周边及间质的纤维组织中,腺腔内均红色EB荧光。全波长扫描,发现EB甲酰胺溶液在625nm波长处具有最大吸收峰,根据梯度浓度EB溶液在625nm测得的OD值得出回归方程y=12.569X+0.120 (y为EB浓度,X为OD值,F=3795.2,决定系数R2=0.998,P<0.001),各组测得OD值代入回归方程求得US+MB组前列腺EB平均浓度10.385±0.790μg/g、US组为6.706±0.312μg/g、MB组6.258±0.352μg/g,CO组6.099±0.508μg/g,US+MB组与其余各组两两比较均有显著差异(P<0.01),说明US+MB组前列腺EB浓度明显高于其余各组,US组与MB及CO组EB浓度均值皆有一定差异,但差异均没有统计学意义(P>0.05)。US、MB、CO组兔前列腺组织在光镜下均未见明显异常,胞浆、细胞核染色均匀,腺体上皮组织排列整齐、完整,腺腔内未见特殊,US+MB组前列腺腺体细胞胞浆、细胞核等在光镜下均未见明显异常,但腺体上皮组织排列紊乱,细胞间结构松散,腺腔内可见大量嗜伊红染的液体;MB组及CO组前列腺组织TUNEL染色光镜下仅见稀少黄褐色阳性细胞,US组对比MB组,TUNEL染色阳性细胞数目明显增加,US+MB组TUNEL阳性细胞光镜下呈分布密集;各组AI值统计,CO组为5.800±1.241%,MB组为6.420±2.454%、US组为30.780±4.634%、US+MB组为42.636±2.430%,US+MB组与其余各组间AI值两两比较,P均<0.01,说明差异具有统计学意义,即US+MB组AI明显高于其余各组,而US组则明显高于MB及CO组,MB组与CO组AI均值未见显著差异。CO、MB组前列腺组织在透射电镜下可见腺体细胞分泌活跃,腺腔内及细胞内均可见大量分泌颗粒,线粒体肿胀,细胞间的紧密连接形态正常;US则腺体细胞活动明显降低,细胞器及分泌颗粒均明显减少,细胞间紧密连接扩张,部分呈囊状扩张;US+MB组可见大量细胞崩解、破坏,腺腔塌陷。结论:1.一定强度的脉冲式超声辐照可通过空化作用提高前列腺组织、细胞的通透性,从而打开前列腺屏障。2.脉冲式超声联合一定浓度的造影剂微泡辐照可有效增强超声开放兔前列腺血管管壁上皮到前列腺腺管上皮组织间的屏障结构,从而提高了兔前列腺的通透性从而提高了药物、大分子物质穿透前列腺的能力。3.超声联合微泡开放血-前列腺屏障的机制主要为:超声波导致微泡在管腔中发生空化作用,空化产生的冲击波以及微射流导致“声孔效应”的发生,造成血管壁被机械性“打孔”,内皮细胞受到管腔压力变化以及空化产生的机械作用刺激而引起收缩,从而引起细胞膜通透性增高、紧密连接开放,生物屏障被打开;吞饮作用、胞吞效应及入胞转运作用。4.脉冲式超声波可通过超声空化作用诱导兔前列腺细胞发生凋亡,而在氟碳气体的“脂氟显”造影剂微泡存在的条件下,该效应可得到明显加强。

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缩略词表  3-4
中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
正文：超声联合微泡开放血－前列腺屏障的研究  11-38
  前言  11-13
  材料与方法  13-20
  结果  20-24
  讨论  24-33
  结论  33-34
  本研究的创新性及自我评价  34-35
  参考文献  35-38
附图  38-42
文献综述  42-47
就读研究生期间发表的论文  47-48
致谢  48-49

超声联合微泡开放血—前列腺屏障的研究

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