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LH-RH-甲氨蝶呤复合物的制备及初步细胞学研究

作　者: 孙艳
导　师: 王驰
学　校: 重庆医科大学
专　业: 生物制药与生物医用材料
关键词: 甲氨蝶呤黄体酮释放激素配体受体主动靶向药物递送系统鼻咽癌HNE-1细胞株卵巢癌SKOV-3细胞株前列腺癌PC-3细胞株细胞学
分类号: R94
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的以临床抗恶性肿瘤药物MTX为模型药物,以黄体酮释放激素[D-Lys~6]LH-RH为导向物,通过共价键连接形成LH-RH-MTX复合物:[Ac-Ser-Tyr-D-Lys(MTX)-Leu-Arg-Pro-NH-Et]。游离MTX、MTX脂质体及LH-RH-MTX分别作用于表达有LH-RH受体的肿瘤细胞,并对其抑制细胞生长的作用进行初步的细胞学评价和比较。方法分别采用MTX和APA为原料,与[D-Lys~6]LH-RH连接制备LH-RH-MTX,优化制备方法。产物重结晶、冻干后用贝克曼分析型HPLC分析,用贝克曼反相半制备HPLC进行纯化与定量,用ESI-MS进行结构验证。游离MTX、MTX脂质体、纯化后的LH-RH-MTX应用MTT法分别在鼻咽癌HNE-1、卵巢癌SKOV-3及前列腺癌PC-3细胞株上进行初步的细胞学评价和比较。结果用APA为原料制备LH-RH-MTX的方法更简便。产物经过分析、纯化和定量后,纯度为98.00%,产率为61.96%。理论上LH-RH-MTX的分子量为1268,ESI-MS分析产物的分子量为1268.70。冻干后产物为黄色结晶性粉末,储存于4℃。MTT法结果表明游离MTX、MTX脂质体、LH-RH-MTX在鼻咽癌HNE-1、卵巢癌SKOV-3及前列腺癌PC-3细胞株上均有细胞抑制作用,抑制率为0.10%-97.73%,有浓度依赖趋势。当药物浓度为200.0ng/ml,作用12h后:在前列腺癌PC-3细胞株上LH-RH-MTX抑制率可高达97.73%, MTX脂质体为54.25%,游离MTX为49.90%;在卵巢癌SKOV-3细胞株上LH-RH-MTX抑制率为48.46%,MTX脂质体为26.81%,游离MTX为8.47%;在鼻咽癌HNE-1细胞株上LH-RH-MTX抑制率为38.92%,MTX脂质体为17.17%,游离MTX为7.41%;在同一种细胞株上不同药物的IC50顺序为:LH-RH-MTX≤MTX脂质体≤游离MTX。结论采用APA为原料与[D-Lys6]LH-RH通过共价键连接制备LH-RH-MTX的方法科学、简单、步骤少、耗时少、产率高。应用贝克曼分析型HPLC和贝克曼反相半制备型HPLC获得了较高的产率和纯度,ESI-MS确证产物的结构。MTT法结果显示游离MTX、MTX脂质体、LH-RH-MTX在这三种细胞株上均表现出抑制效果,不同细胞上抑制率的大小顺序为:前列腺癌PC-3≥卵巢癌SKOV-3≥鼻咽癌HNE-1;同一种细胞株上不同药物抑制率的顺序:LH-RH-MTX≥MTX脂质体≥游离MTX;有浓度依赖趋势,给药12h后抑制率达到最大;LH-RH-MTX复合物可与表达有相应受体的肿瘤细胞特异性结合并发挥抑制作用,作用优于MTX脂质体和游离MTX。提示用LH-RH做为TDDS系统中的导向物,实现药物的靶向释放,提高药物生物利用度是可行的。

LH-RH-甲氨蝶呤复合物的制备及初步细胞学研究

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