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拟松材线虫体表微生物及其致病作用研究

作　者: 张兴华
导　师: 朱天辉
学　校: 四川农业大学
专　业: 森林保护学
关键词: 拟松材线虫苯丙烷代谢杓兰果胶杆菌
分类号: S763.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

近年来在我国的许多非松材线虫疫区(重庆南山和福建邵武等)的马尾松发生大面积死亡,但是死树中没有发现松材线虫,而是大量拟松材线虫,确认了拟松材线虫对松树具有致病性,但它的致病机理目前还尚未有研究。本试验以某地拟松材线虫为材料,分离并鉴定其体表微生物;利用体表微生物的代谢产物处理马尾松松针,分析体表微生物对松针的致病作用,并筛选出强致病菌;将强致病菌的代谢产物分离为蛋白质和非蛋白液,室内测试其对马尾松松针苯丙烷类代谢途径的影响,选择效果显著的微生物的代谢产物对三年生马尾松进行接种,观察其致病结果,测试其对马尾松苯丙烷类代谢途径的影响,得到以下结论:1.在拟松材线虫的体表分离到26种细菌和4种真菌。拟松材线虫在不同培养阶段,体表微生物体系不同,未经纯化培养的线虫体表微生物种类最多为30种、1次纯化后微生物种类变为21种、小麦培养基继代培养1次后20种、继代培养2次后为18种、继代培养3次后微生物种类是9种、继代培养4次后微生物数为7种、继代培养5次后为5种。在人工培养6次后,线虫体表还存在的菌有:枯草芽孢杆菌Ⅱ、枯草芽孢杆菌Ⅵ、嗜麦芽寡养单胞菌Ⅲ、荧光假单胞、解淀粉芽孢杆菌Ⅱ,这5种菌和线虫建立了牢固的附生关系,能长期在线虫体表附生。2.从线虫体表分离到的微生物共30种,通过代谢产物粗测松针筛选出9种对马尾松致病作用明显的细菌,它们是:枯草芽孢杆菌Ⅲ、嗜麦芽寡养Ⅰ、杓兰果胶杆菌、解淀粉芽孢杆菌Ⅰ、枯草芽孢杆菌Ⅴ、肺炎杆菌Ⅰ、恶臭假单胞、嗜麦芽寡养单胞菌Ⅲ、根癌农杆菌。这9种菌在线虫体表的存在时间最长的为嗜麦芽寡养单胞菌Ⅲ为继代培养5次;恶臭假单胞、根癌农杆菌在纯化后消失;杓兰果胶杆菌、枯草芽孢杆菌Ⅲ、枯草芽孢杆菌Ⅴ、肺炎杆菌Ⅰ均在人工培养2代后消失,这说明拟松材线虫经继代培养2次后体表的致病微生物消失66%,这将影响拟松材的致病性。3.本实验将代谢产物分离为蛋白和非蛋白液,室内处理松针,分12h,24h,36h测试松针总酚含量、PAL、PPO、POD活性变化,说明松树收到浸染情况。并筛选出致病作用最强的杓兰果胶杆菌非蛋白液。4.将杓兰果胶杆菌的非蛋白液按原液,稀释1倍,菌原液进行接种,通过总酚含量、PAL、PPO、POD活性变化的表明,杓兰果胶杆菌的非蛋白液浓度越高致病力越强。将无菌拟松材线虫和拟松材线虫接种效果对比可知,拟松材线虫比无菌线虫作用强,说明拟松材线虫的体表微生物是其必要的致病因素。5.拟松材线虫体表携带的杓兰果胶杆菌非蛋白液对马尾松有致病作用,杓兰果胶杆菌在线虫体表的附生是拟松材线虫致病的必要因素,也是杓兰果胶杆菌保持活力的必要条件。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
1 前言  10-26
  1.1 研究目的和意义  10
  1.2 拟松材线虫研究概况  10-19
    1.2.1 拟松材线虫生物学特性  10-11
    1.2.2 拟松材线虫的分布  11-12
    1.2.3 拟松材线虫的致病性  12-14
    1.2.4 拟松材线虫的危害  14-15
    1.2.5 拟松材线虫的鉴定  15
    1.2.6 植物寄生线虫致病机理  15-18
    1.2.7 松材线虫的致病机理  18-19
    1.2.8 拟松材线虫可能的致病机理  19
  1.3 细菌和真菌的分子生物学鉴定  19-24
    1.3.1 16S rRNA应用于细菌分类鉴定  19-21
    1.3.2 ITS序列分析鉴定真菌  21-24
  1.4 PAL、POD、PPO、总酚在植物抗逆性中的研究  24-26
2 试验路线  26-27
3 材料和方法  27-36
  3.1 拟松材线虫的分离、培养与鉴定  27-28
    3.1.1 试验材料  27
    3.1.2 研究方法  27-28
  3.2 拟松材线虫体表微生物的分离与鉴定  28-31
    3.2.1 试验材料  28
    3.2.2 研究方法  28-31
  3.3 体表微生物对松针的致病性  31-35
    3.3.1 试验材料  31
    3.3.2 研究方法  31-35
  3.4 在三年生马尾松上接种致病菌实验  35-36
    3.4.1 试验材料  35-36
    3.4.2 研究方法  36
4 结果与分析  36-51
  4.1 拟松材线虫的分离、鉴定和培养  36-37
  4.2 拟松材线虫体表微生物  37-40
    4.2.1 拟松材线虫体表微生物体系  37
    4.2.2 不同培养阶段线虫体表微生物的变化趋势  37-40
  4.3 体表微生物对松针的致病性  40-47
    4.3.1 松针的受害反应  40
    4.3.2 各菌代谢产物处理松针的粗测结果  40-42
    4.3.3 各菌代谢产物处理松针的方差分析  42
    4.3.4 总酚含量、PAL、POD、PPO活性的变化  42-46
    4.3.5 代谢产物对马尾松松针苯丙烷类代谢的影响  46-47
  4.4 三年生马尾松接种杓兰果胶杆菌试验  47-51
    4.4.1 症状观察  47-48
    4.4.2 杓兰果胶杆菌非蛋白处理对马尾松苯丙烷代谢的影响  48-50
    4.4.3 杓兰果胶杆菌非蛋白对三年生马尾松的致病性  50-51
5 结论与讨论  51-53
  5.1 拟松材线虫体表微生物各类复杂  51
  5.2 体表微生物对马尾松松针的致病作用  51-52
  5.3 杓兰果胶杆菌非蛋白代谢产物对三年马尾松的致病作用  52
  5.4 体表微生物室必要的致病因素  52
  5.5 拟松材线虫-细菌复合体  52-53
6 展望  53-54
致谢  54-55
参考文献  55-57

拟松材线虫体表微生物及其致病作用研究

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