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绿豆中清热解毒成分的提取及稳定性的研究

作　者: 王旭
导　师: 李健
学　校: 哈尔滨商业大学
专　业: 食品科学
关键词: 绿豆抑菌清热解毒有效成分
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

以绿豆为原料,乙醇粗提,两相萃取。利用萃取物进行了抑菌、体内外清除内毒素实验、解热试验,并对萃取物的成分进行分离制备,对成分进行定性。采用乙醇冷凝回流萃取得到总提取物,通过显色基质鲎试验法证明绿豆提取液具有清除细菌内毒素的作用,并以内毒素清除率为指标确定最佳提取条件为70%乙醇,料液比1：20,温度60℃,提取时间2h；总提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取物经鲎试验证明正丁醇萃取物为有效萃取物,内毒素清除率为78.90%。抑菌实验。总提取物和正丁醇萃取物对枯草芽孢杆菌、白色葡萄球菌、大肠杆菌、青霉有不同的抑制作用,其中正丁醇萃取物抑菌活性最强,并确定正丁醇萃取物的最小抑菌浓度：大肠杆菌0.85mg/ml、枯草芽孢杆菌0.79 mg/ml、白色葡萄球菌0.59mg/ml、青霉35.32mg/ml。且抑菌活性在温度30℃～70℃,pH值7.0～8.0的条件下都具有较好的抑菌稳定性,不受紫外线照射的影响。清热解毒作用研究。气相色谱外标法测定正丁醇萃取物的正丁醇残留量0.0236%；浓度为10mg/ml、100mg/ml正丁醇萃取物,能显著降低小鼠的死亡率,延长生存时间,与内毒素组相比有极显著性的差异(P<0.01)；浓度为1mg/ml,与内毒素组比较有显著性差异(P<0.05)；对存活小鼠血清、肝脏、脑中SOD活力和MDA的含量进行测定。结果表明浓度为10mg/ml、100mg/ml正丁醇萃取物能极显著提高小鼠体内SOD活力,降低MDA的水平,与内毒素组比较(P<0.05)；浓度为1mg/ml时,能显著性降低MDA的水平(P<0.05)；同时对内毒素致热小鼠发热进行解热试验,给药1h后测定肛温,浓度为1.0%和0.6%时,与模型组比较呈现显著性差异(P<0.05),给药2h后,0.2%的正丁醇萃取物较模型组也表现出显著性差异(P<0.05)。正丁醇萃取物的组分分离制备。薄层层析筛选出展开剂乙酸乙酯：正丁醇：水：醋酸=4：1：1：1时,分离5种组分；用乙酸乙酯：正丁醇=4：1、乙酸乙酯：正丁醇：醋酸=20：5：3进行硅胶柱梯度洗脱,分离出组分F01(产率20.12%)、F02(产率15.35%)；残留液过聚酰胺层析柱,60%乙醇进行洗脱,得到组分F03(产率12.56%)；残留液进一步用TLC制备得到F05(产率16.05%)；各组分经薄层层析确定各组分为单一组分,熔点为：正丁醇247.3～261.5、F01,259.8～265.9、F02,281.6～287.5、F03,284.1～291.3、F05,196.0～201.6。通过薄层染色反应,确定F02为黄酮；F04、F05是皂苷。稳定性试验。正丁醇萃取物极易潮解；温度对F01、F02、F04组分含量影响较大,当温度超过70℃,含量急剧下降,只有在温度50℃以下时,含量基本保持不变,F03在温度超过100℃时,才对其成分造成破坏,性状无变化；各组分不受紫外线照射影响,在pH值5.0-9.0范围内比较稳定。其中F01耐酸性较强。

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摘要 5-6Abstract 6-121 绪论 12-20 1.1 绿豆 12-16 1.1.1 绿豆简介 12 1.1.2 产地分布 12 1.1.3 绿豆的成分 12-13 1.1.4 绿豆的药理作用 13-14 1.1.5 绿豆的应用 14-16 1.2 清热解毒 16-18 1.2.1 清热解毒定义 16 1.2.2 清热解毒的研究方法 16-18 1.3 本课题来源及研究意义 18 1.4 论文研究内容 18-19 1.4.1 绿豆提取液的制备 18 1.4.2 绿豆正丁醇提取物抑菌作用研究 18-19 1.4.3 绿豆正丁醇提取物清热解毒作用研究 19 1.4.4 绿豆正丁醇萃取物化学成分分离纯化 19 1.4.5 清热解毒有效成分稳定性的研究 19 1.5 本章小结 19-202 绿豆提取液的制备 20-29 2.1 引言 20 2.2 实验仪器与材料 20-21 2.2.1 主要实验仪器 20-21 2.2.2 实验材料 21 2.3 实验方法与步骤 21-24 2.3.1 绿豆预处理 21 2.3.2 提取液的制备 21 2.3.3 工艺流程 21 2.3.4 鲎试验 21-22 2.3.5 不同的提取条件对提取效果的影响 22 2.3.6 不同溶剂萃取物对内毒素的清除作用 22-23 2.3.7 清除内毒素有效成分的初探 23-24 2.4 结果与讨论 24-28 2.4.1 内毒素标准曲线的绘制 24-25 2.4.2 不同提取条件对提取效果的影响 25-27 2.4.3 不同溶剂萃取物对内毒素的清除作用 27 2.4.4 绿豆提取物成分的定性测定结果 27-28 2.5 本章小结 28-293 绿豆正丁醇萃取物抑菌作用研究 29-37 3.1 引言 29 3.2 实验仪器与材料 29-30 3.2.1 仪器与设备 29 3.2.2 主要实验材料 29-30 3.3 实验方法及步骤 30-32 3.3.1 培养基的制备 30 3.3.2 菌悬液的制备 30 3.3.3 滤纸片法测定抑菌效果 30-31 3.3.4 绿豆提取物抑菌活性稳定性研究 31-32 3.4 结果与讨论 32-35 3.4.1 不同萃取物的抑菌效果 32-33 3.4.2 不同浓度正丁醇萃取物对各个菌种的抑菌效果 33-34 3.4.3 正丁醇萃取物的MIC测定结果 34 3.4.4 正丁醇提取物抑菌稳定性试验 34 3.4.5 热处理对抑菌效果的影响 34-35 3.4.6 紫外线处理对抑菌效果的影响 35 3.4.7 pH值对抑菌效果的影响 35 3.5 本章小结 35-374 绿豆正丁醇萃取物清热解毒作用研究 37-46 4.1 前言 37 4.2 实验仪器与材料 37-38 4.2.1 主要实验仪器 37 4.2.2 主要实验材料 37-38 4.3 实验方法及步骤 38-41 4.3.1 气相色谱法测定正丁醇残留 38 4.3.2 正丁醇萃取物对对内毒素致小鼠死亡率的影响 38 4.3.3 内毒素致小鼠死亡中血清、肝脏、脑中中SOD活力的测定 38-39 4.3.4 内毒素致小鼠死亡中血清、肝脏、脑中中丙二醛(MDA)的测定 39-40 4.3.5 正丁醇萃取物对内毒素致小鼠发热的解热试验 40 4.3.6 数据处理及结果判定 40-41 4.4 实验结果与分析 41-44 4.4.1 气相色谱法测定正丁醇残留 41-43 4.4.2 正丁醇萃取物对对内毒素致小鼠死亡率的影响 43 4.4.3 内毒素致小鼠死亡中小鼠血清、肝脏、脑SOD活力的测定 43-44 4.4.4 内毒素致小鼠死亡中血清、肝脏、脑中丙二醛(MDA)的测定 44 4.4.5 正丁醇萃取物对内毒素致小鼠发热的解热试验 44 4.5 本章小结 44-465 绿豆正丁醇萃取物化学成分分离纯化 46-56 5.1 引言 46 5.1.1 柱层析 46 5.1.2 薄层色谱 46 5.2 实验仪器与材料 46-47 5.2.1 实验仪器 46-47 5.2.2 实验材料 47 5.3 实验内容 47-50 5.3.1 薄层层析分离正丁醇提取物的成分 47-48 5.3.2 纯化路线 48 5.3.3 硅胶柱层析分离正丁醇提取物的成分 48-49 5.3.4 聚酰胺柱层析分离正丁醇组分 49 5.3.5 TLC分离制备正丁醇组分 49 5.3.6 各组分的紫外扫描图谱 49 5.3.7 纯度的鉴定 49-50 5.3.8 各组分的薄层检识 50 5.4 结果与讨论 50-54 5.4.1 硅胶柱层析分离正丁醇提取物的成分 50-51 5.4.2 硅胶柱层析分离正丁醇提取物的成分 51-52 5.4.3 聚酰胺柱层析分离正丁醇组分 52-53 5.4.4 TLC分离制备正丁醇组分 53 5.4.5 各组分的紫外扫描图谱 53-54 5.4.6 纯度的测定 54 5.4.7 薄层检识 54 5.5 本章小结 54-566 清热解毒有效成分稳定性的研究 56-61 6.1 引言 56 6.2 实验仪器与材料 56 6.2.1 实验仪器 56 6.2.2 实验材料 56 6.3 实验方法与步骤 56-58 6.3.1 各组分标准曲线的测定 56-57 6.3.2 微生物限量的测定 57 6.3.3 各组分稳定性试验 57-58 6.4 实验结果与分析 58-60 6.4.1 各组分的标准曲线 58 6.4.2 湿度对稳定性的影响 58-59 6.4.3 温度对稳定性的影响 59 6.4.4 紫外线照射试验 59-60 6.4.5 pH试验 60 6.5 本章小结 60-61结论 61-63参考文献 63-67攻读学位期间发表的学术论文 67-68致谢 68

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