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多种方法诱导干细胞向心肌细胞分化的实验研究

作　者: 初志辉
导　师: 惠杰
学　校: 苏州大学
专　业: 心血管内科
关键词: 骨髓间充质干细胞心肌细胞心肌细胞裂解液间接接触
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 81次
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内容摘要

目的:通过体外实验,观察化学诱导剂和模拟的生物微环境诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化。方法:取6~8w龄SD大鼠股骨骨髓,培养至第二代,经流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞纯度97%以上,然后分成五组:A组,单纯DMEM细胞培养组(对照组);B组,5-氮杂胞苷诱导组;C组,心肌细胞裂解液组;D组,心肌细胞裂解液组+5-氮杂胞苷组;E组,细胞间接接触组。根据各自实验条件诱导至第2w和第4w时,收获细胞。应用免疫组化法检测诱导后骨髓间充质干细胞表达心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)、连接蛋白43(CX-43),血管内皮细胞表面抗原标志CD31及肌性标志α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)的表达情况。应用RT-PCR法检测各组早期心肌细胞特异性转录因子GATA4、NKX2.5、β-MHC及成熟心肌细胞特异性转录因子α-MHC基因的表达情况,并进行简单量的比较。结果:免疫组化检测:实验组诱导2w后,cTnT、CX-43表达阴性或低表达,诱导4w后呈阳性表达,实验组较对照组有统计学差异(P<0.05),实验组之间无显著差异(P>0.05);对照组及B组无CD31表达,C, D, E组表达呈弱阳性,组间无统计学差异(P>0.05);α-SCA诱导前骨髓间充质细胞中既有低度表达,诱导后浓度明显增高,实验组间无差异(P>0.05)。RT-PCR表达情况:实验组诱导2w后条带不明显;诱导4w后均表达GATA4, NKX2.5,β-MHC,无α-MHC表达,从条带密度和亮度分析,实验组较对照组有显著差异(P<0.05),实验组间无显著差异(P>0.05)。结论:1. 5-氮杂胞苷可以诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化。2.骨髓间充质干细胞因其“环境依赖性分化”特性,具有分化为心肌细胞的潜能。心肌细胞裂解液和细胞间接接触模拟的心肌微环境也可以诱导骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞,且诱导的效果与诱导的时间及诱导剂浓度相关,分化的细胞介于成熟的心肌细胞和心肌祖细胞之间的心肌细胞前体。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-8
前言  8-9
材料和方法  9-16
结果  16-19
讨论  19-24
结论  24-25
参考文献  25-29
附图  29-32
综述胚胎干细胞向心肌细胞分化及调控  32-39
  参考文献  37-39
攻读学位期间公开发表的文章  39-40
中英文对照缩略词表  40-41
致谢  41

多种方法诱导干细胞向心肌细胞分化的实验研究

内容摘要

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