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活性氧激活线粒体凋亡通路介导高糖诱导心肌细胞凋亡的研究

作　者: 姜丁文
导　师: 刘畅
学　校: 辽宁医学院
专　业: 内科学
关键词: 高糖活性氧 p53 线粒体凋亡心肌细胞
分类号: R587.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 44次
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内容摘要

目的利用原代培养的乳鼠心肌细胞为模型,研究不同浓度葡萄糖对心肌细胞凋亡的影响以及活性氧和p53在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用,揭示氧化应激和p53转位介导的线粒体凋亡通路与糖尿病心肌病的发发生发展的关系,对糖尿病心肌病的临床治疗提供一种方向。方法1、取新生的SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养,将其接种于培养板或培养瓶中,待细胞长成单层贴壁后,将培养的乳鼠心肌细胞随机分为4组:A组(对照组,葡萄糖浓度为5.6mmol/L);B组(葡萄糖浓度为16.7mmol/L);C组(葡萄糖浓度为25mmol/L);D组(葡萄糖浓度为33.3mmol/L)。应用噻唑盐比色法和荧光分光光度计分别检测细胞活力和活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)含量,观察不同浓度葡萄糖对心肌细胞的影响,明确高糖致心肌细胞凋亡的最佳浓度。2、以高糖诱导的心肌细胞为模型,应用不同干预因素进行处理,随机分为4组:⑴对照组(甘露醇浓度为25mmol/L);⑵高糖组(葡萄糖浓度为25mmol/L);(3)高糖+抗氧化剂组(抗氧化剂终浓度为10mmol/L);(4)高糖+p53抑制剂组(p53抑制剂终浓度为50μmol/L)。应用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot半定量检测各组细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(caspase-9)和p53的表达程度,荧光分光光度计检测细胞内的活性氧,分光光度计检测上清液中的超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的含量。结果1、应用混合酶一步消化法,差速贴壁,成功地培养出纯度较高的心肌细胞,α-平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学鉴定为阳性。2、与A组(对照组,葡萄糖浓度为5.6mmol/L)相比,B组(葡萄糖浓度为16.7mmol/L)、C组(葡萄糖浓度为25mmol/L)和D组(葡萄糖浓度为33.3mmol/L)的心肌细胞活力逐渐降低,活性氧逐渐升高,其中A组、B组、C组呈浓度依赖关系,C组与D组细胞活力和活性氧没有明显差异;从中可以得到高糖诱导心肌细胞凋亡的最佳浓度为25mmol/L。3、与对照组相比,高糖组心肌细胞凋亡率和ROS明显升高,上清液中的SOD含量明显降低,Caspase-9和线粒体蛋白p53表达增多;与高糖组相比,高糖+抗氧化剂组心肌细胞凋亡率和ROS明显降低,上清液中SOD明显升高,Caspase-9和线粒体蛋白p53表达减少;与高糖组相比,高糖+p53抑制剂组的心肌细胞凋亡率和ROS明显降低,上清液中SOD含量升高,Caspase-9和线粒体蛋白p53表达减少。结论1、高糖诱导了体外培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞的凋亡;2、高糖诱导心肌细胞凋亡过程中,ROS介导p53转位到线粒体激活线粒体凋亡通路,引起心肌细胞凋亡;3、p53反馈调节细胞内ROS的积累,二者相互作用,共同影响心肌细胞的凋亡。

全文目录

摘要  4-8
  中文论著摘要  4-6
  英文论著摘要  6-8
英文缩略语  8-9
前言  9-11
实验材料与方法  11-16
实验结果  16-24
讨论  24-26
结论  26-27
本试验创新性的自我评价  27-28
参考文献  28-30
附录  30-44
  综述  30-41
  在学期间科研成绩  41-42
  致谢  42-43
  个人简介  43-44

活性氧激活线粒体凋亡通路介导高糖诱导心肌细胞凋亡的研究

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