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软脂酸对酒精体外诱导的脂肪变性肝细胞的影响

作　者: 王春晖
导　师: 卿笃信
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: 乙醇 L-02细胞酒精性脂肪肝软脂酸 SREBP-1c
分类号: R575
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的根据前期试验选择合适浓度的乙醇建立酒精体外诱导的肝细胞脂肪变性模型,确定不同浓度的软脂酸对酒精体外诱导的肝细胞脂肪变性及损伤的影响,并探讨其影响机制。方法根据前期试验,选择对细胞存活率影响不大且可以建立肝细胞脂肪变性模型的乙醇浓度为制备本实验肝细胞脂肪变性模型的乙醇浓度(0.6%),采用MTT法测定不同浓度的软脂酸(2.5、5、10、20.30、40μmol/L)对酒精体外诱导的脂肪变性肝细胞存活率的影响,光学显微镜观察不同组别油红O染色情况,全自动生化仪检测细胞培养基中ALT、AST泄露量,试剂盒检测各组细胞内甘油三酯(TG)水平,采用Westernblot法检测各组细胞核内成熟的SREBP-1c表达量。结果1.用MTT法测得酒精诱导组的肝细胞的存活率较空白对照组降低；软脂酸干预后,与酒精诱导组相比,当软脂酸浓度≤10μmol/L时,肝细胞的存活率增高；当软脂酸的浓度≥20μmol/L时,细胞的存活率则降低,且随着软脂酸浓度的增加存活率依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。2.肝细胞在加入了含0.6%的乙醇的培基中培养大于或等于两天,油红O染色可见肝细胞胞浆内含有大小不一被染成橘红色的脂滴,而空白对照组肝细胞内无明显脂滴形成。如同时加入软脂酸共同培养48小时,当软脂酸浓度≤10μmol/L时,肝细胞内的脂滴较酒精诱导组减少,且软脂酸浓度越大,减少作用越明显；相反,当软脂酸浓度≥20μmol/L时,肝细胞内脂滴增加,.且随着软脂酸浓度的增大,增加作用越明显。3.用0.6%的乙醇干预人正常肝细胞L-02后ALT、AST(?)世漏量、细胞内TG含量均比空白对照组高(P<0.05)；软脂酸共同培养48小时后,与酒精诱导组相比,当软脂酸浓度≤10μmol/L时,上述指标均降低,且随着软脂酸浓度的增加而依次降低(P<0.05),当软脂酸浓度≥20μmol/L(?)时,上述指标均升高,ALT、AST随软脂酸浓度的升高而依次升高(P<0.05),当软脂酸浓度为40μmol/L时TG的量较20、30μmol/L时降低(P<0.05)。4.用0.6%的乙醇干预后肝细胞核内成熟的SREBP-1c的表达量较空白对照组升高(P<0.05)；软脂酸共同培养48小时后,与酒精诱导组相比,当软脂酸浓度≤10μmol/L时,核内成熟的SREBP-1c表达量降低,且随软脂酸浓度的增加而依次降低(P<0.05)；当软脂酸浓度≥20μmol/L时,核内成熟的SREBP-1c表达量升高,且随着软脂酸浓度的增加而依次增高(P<0.05)。结论1.0.6%的乙醇作用于肝细胞两天或多于两天可以建成肝细胞脂肪变性模型,并且可以引起肝酶泄漏量的增高,且肝细胞脂肪变性与核内成熟的SREBP-1c的表达量增高有关。2.软脂酸干预后,在一定浓度内对酒精体外诱导的脂肪变性肝细胞有防治作用,且呈剂量效应关系；超出一定浓度却反过来加重肝细胞的脂肪变性。3.软脂酸对酒精诱导的脂肪变性肝细胞的影响与调节肝细胞核内成熟的SREBP-1c有关。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-13
缩略语及符号  13-14
第一章前言  14-17
第二章实验研究  17-27
  2.1 材料  17
    2.1.1 细胞株  17
    2.1.2 主要试剂  17
  2.2 主要仪器  17-18
  2.3 主要试剂的配制  18-20
  2.4 实验方法  20-27
    2.4.1 细胞培养、传代、冻存、复苏  20-21
    2.4.2 实验分组  21-22
    2.4.3 MTT法测各组细胞的存活率  22-23
    2.4.4 油红O染色  23
    2.4.5 细胞内甘油三酯及ALT、AST泄露量的测定  23-24
    2.4.6 Westernblot法检测各组细胞核内成熟的SREBP-1c表达  24-26
    2.4.7 统计学方法  26-27
第三章结果  27-36
  3.1 软脂酸对酒精体外诱导的脂肪变性肝细胞增殖的影响  27-28
  3.2 各组细胞油红O染色结果  28-30
  3.3 各组细胞内TG含量测定  30-32
  3.4 各组细胞AST泄漏量测定结果  32
  3.5 各组细胞ALT泄漏量测定结果  32-34
  3.6 Westernblot法检测各组细胞核内成熟的SREBP-1c的表达量  34-36
第四章讨论  36-42
  4.1 酒精性肝病的治疗现状  36-37
  4.2 酒精诱导体外肝细胞脂肪变性模型的建立  37-38
  4.3 软脂酸对酒精体外诱导的脂肪变性肝细胞的影响  38-41
  4.4 小结  41-42
第五章结论  42-43
参考文献  43-47
综述  47-59
  参考文献  54-59
致谢  59

软脂酸对酒精体外诱导的脂肪变性肝细胞的影响

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