学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

脂多糖对Balb/c鼠TSHβ剪接变体基因表达影响的实验研究

作　者: 刘浩
导　师: 李兰英
学　校: 天津医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 促甲状腺素 剪接变体 Balb/c小鼠 LPS 定量PCR
分类号: R581
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 7次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的Vincent BH等人发现C57BL/6小鼠的垂体、甲状腺、骨髓组织中表达一种TSHβ剪接变体,它的转录起始于第4内含子3端的27个碱基,因此它缺少第4外显子,含有第5外显子的全部编码区。随后Jeremy S等又报道了人的垂体、外周血和甲状腺中也同样表达TSHβ剪接变体。它和小鼠的TSHβ剪接变体很相似,含有内含子2的27个核苷酸和第3外显子全部编码区。它是首次被发现含有部分内含子的TSHβ剪接体,并体外实验初步证实小鼠的TSHβ剪接变体具有生物学活性。但是,目前为止,对于它的表达部位、生理及病理学意义还不清楚。我们在确认TSHβ剪接变体在Balb/c小鼠垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血和淋巴结中表达的情况下,利用LPS制备小鼠内毒素性全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)模型,通过检测TSHβ剪接变体在垂体、甲状腺、骨髓、脾组织中的表达变化,探讨机体发生感染时TSHβ剪接变体对调节循环中甲状腺激素水平的作用。方法本实验首先选择36只雌雄各半的Balb/c小鼠,7－8周龄,随机分为6组,每组6只,分别为：0h组,6h组,12h组,24h组,48h组,72h组。0h组：腹腔注射生理盐水；其它各组均经腹腔注射LPS,3mg/kg体重。根据设置的时间组,于注射后取动物全血,采用RIA法和ELISA法分别检测小鼠血清中甲状腺激素和促甲状腺激素水平。使用PCR技术对TSHβ剪接变体在Balb/c小鼠垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血、淋巴结中表达进行检测,并对甲状腺该基因的扩增产物进行测序。用SYRR GREEN实时荧光定量PCR法分析不同处理时间下TSHβ剪接变体基因mRNA表达。结果0h血清TT4水平为24.5875 nmol/L,与其相比其它各组均下降(P<0.01),24 h下降最明显为9.3283 nmol/L,48 h开始回复,直至72h为18.696 nmol/L仍未回复到正常水平。TSH水平没有明显变化。PCR结果显示垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血、淋巴结中表达TSHβ剪接变体,但除垂体外其它组织都不表达天然型TSHβ。骨髓中TSHβ剪接变体表达于6h,12h,24h较0h下降,48h恢复正常,0h为(1.000±0.000),6 h为(0.511027±0.10390)(p<0.01),12 h为(0.36788±0.06024)(p<0.01),24 h为(0.198357±0.03266)(p<0.01)。甲状腺中TSHβ剪接变体表达于6h较0h升高,0h为(1.000±0.000),6h为(10.43319±4.86834)(P<0.01)。其它各时间点较0h比较甲状腺中TSHβ剪接变体表达均没有统计学意义。垂体中TSHβ剪接变体及天然型TSHβ表达各时间点均未见明显变化。结论1.PCR结果显示Balb/c小鼠的垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血、淋巴结组织中均表达TSHβ剪接变体,但天然型TSHβ仅在垂体中表达。2.腹腔注射LPS(3mg/kg体重)可降低循环中甲状腺激素水平,但对TSH没有显著影响。3.LPS使Balb/c小鼠甲状腺组织中TSHβ剪接变体mRNA的表达明显升高,但LPS抑制骨髓TSHβ剪接变体mRNA的表达,提示TSHβ剪接变体参与炎症反应过程,在免疫-内分泌网络调节中有重要作用,免疫系统来源的TSHβ剪接变体的生理病理学作用和调节机制有待进一步研究。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
符号说明  10-12
前言  12-15
  研究现状、成果  12-14
  研究目的、方法  14-15
1、材料与方法  15-21
  1.1 实验动物  15
  1.2 主要试剂  15
    1.2.1 处理因素试剂  15
    1.2.2 分子生物学试剂  15
    1.2.3 血清中甲状腺激素及TSH水平检测试剂  15
    1.2.4 主要液体的配置  15
  1.3 主要仪器  15-16
  1.4 实验动物分组及处理方法  16
  1.5 观察指标及检测方法  16-21
    1.5.1 血清中甲状腺激素和促甲状腺激素水平检测  16-17
    1.5.2 TSHβ在小鼠垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血和淋巴结组织中的表达  17-21
2、结果  21-30
  2.1 血清甲状腺激素(TT4)和促甲状腺激素(TSH)水平变化  21-22
  2.2 TSHβ剪接变体在小鼠垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血和淋巴结中的表达  22-25
    2.2.1 总RNA提取质量鉴定  22
    2.2.2 正常Balb/c小鼠垂体、甲状腺、骨髓、脾、外周血、淋巴结各基因扩增电泳照片  22-23
    2.2.3 TSHβ剪接变体序列分析结果  23-25
  2.3 不同器官TSHβ剪接变体mRNA表达  25-30
    2.3.1 Balb/c鼠骨髓TSHβ剪接变体基因mRNA表达  25-26
    2.3.2 Balb/c鼠垂体天然型TSHβ基因mRNA表达  26-27
    2.3.3 Balb/c鼠垂体TSHp剪接变体基因mRNA表达  27-28
    2.3.4 Balb/c鼠甲状腺TSHp剪接变体基因mRNA表达  28-29
    2.3.5 Balb/c鼠脾TSHp剪接变体基因mRNA表达  29-30
3、讨论  30-35
  3.1 血清中TSH和TT4的变化  30-31
  3.2 LPS对TSHp剪接变体在垂体、骨髓、甲状腺中表达的影响  31-32
    3.2.1 LPS刺激对骨髓中TSHβ剪接变体mRNA表达的影响  31-32
    3.2.2 LPS刺激对甲状腺中TSHβ剪接变体mRNA表达的影响  32
    3.2.3 LPS刺激对垂体中TSHβ剪接变体mRNA表达的影响  32
  3.3 TSHβ剪接变体病理生理学意义的探讨  32-35
结论  35-36
参考文献  36-39
发表论文和参加科研情况说明  39-40
综述 低T3综合症的研究进展  40-58
  参考文献  48-58
致谢  58

相似论文

  1. 草菇采后生理生化及保鲜方法的研究,S646.13
  2. 溶藻弧菌毒力相关基因的检测与保藏方法的研究,S943
  3. 微生物有机肥防治土传棉花黄萎病的效果及对根际微生物影响,S144.1
  4. 新疆紫草细胞的稀土生物学效应及遗传转化,S567.239
  5. 鸭ADSL与PurH基因序列特征及表达与肌肉肌苷酸（IMP）含量的相关性分析,S834
  6. β-防御素1基因在小鼠乳腺组织中表达的研究,S852.4
  7. 荧光定量PCR方法在土传烟草青枯病生防研究中的应用,S435.72
  8. 大白菜霜霉菌诱导抑制性消减cDNA文库的构建及防御相关基因的表达分析,S436.341
  9. 烟夜蛾气味受体基因和精氨酸激酶基因的克隆与表达分析,S433.4
  10. 棉铃虫与烟夜蛾寄主选择机制的比较研究,S435.622.3
  11. 玉米光周期敏感基因ZmELF4的克隆及功能验证,S513
  12. 苹果Ca2+/H+反向转运体活性及其基因表达特性研究,S661.1
  13. 寒胁迫下佛手差异表达基因的研究,S666.9
  14. 萝卜镉胁迫响应相关基因克隆及其表达分析,S631.1
  15. 苏钟猪TLR4基因多态性及编码区C1027A功能分析,S828
  16. MMP-7和溶菌酶在DSS诱导的Balb/c小鼠溃疡性结肠炎模型发病机制中的作用,S858.91
  17. PCV2分离株增殖特性研究及板蓝根多糖、黄芪多糖对PCV2体外复制的影响,S858.28
  18. 固始鸡胚期消化管发育的研究,S831
  19. 猪细小病毒感染对猪外周血淋巴细胞细胞因子转录时相影响的研究,S858.28
  20. 河南省樱桃谷鸭乙型肝炎病毒（DHBV）分子流行病学调查及FNC抗DHBV体内试验研究,S858.32
  21. 五个棉花逆境相关锌指蛋白基因的克隆与功能研究,S562

中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 甲状腺疾病
© 2012 www.xueweilunwen.com