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GLP-1（7-36）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及作用机制

作　者: 袁小燕
导　师: 莫朝晖
学　校: 中南大学
专　业: 内科学
关键词: GLP-1(7-36) HUVECs 高糖凋亡
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：研究GLP-1(7-36)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响及作用机制。方法：正常糖(5mmol/l)和高糖(33mmol/l)环境下培养的HUVECs分别加入不同浓度的GLP-1(7-36)(0nmol/1,0.3nmol/l, 3nmol-1,30nmol/1)并干预不同时间(24h,48h,72h),然后行MTT检测细胞活力以初步确定GLP-1(7-36)合适的干预时间及浓度点。实验分组如下：①正常糖浓度对照组(NG)、②高糖浓度损伤组(HG)、③高糖浓度下加入3nmol/l GLP-1组(HG+GLP-1)、④正常糖浓度下加入3nmol/l GLP-1组(NG+GLP-1)、⑤加P13K抑制剂的高糖并GLP-1组(HG+GLP-1+Wortmannin).⑥加eNOS抑制剂的高糖并GLP-1组(HG+GLP-1+L-NAME).各实验组分别采用流式细胞仪检测细胞早期凋亡率、western blot检测p-AKt和p-eNOS蛋白含量、一氧化氮检测试剂盒检测NO的浓度。结果：(1)HUVECs经高糖培养48h、72h后MTT检测细胞活力下降(p<0.05),经3nmol/l、30nmol/l GLP-1(7-36)干预48h、72h后活力明显增加(p<0.01),而干预相同时间点的不同浓度组之间无明显差异(p>0.05)；(2)HG组与NG组相比,细胞早期凋亡率显著增加(p<0.01),p-AKt、p-eNOS蛋白表达下降(p<0.05),NO的产量下降(p<0.05)；(3)HG+GLP-1组与HG组相比,细胞早期凋亡率下降(p<0.05),p-AKt、p-eNOS蛋白表达上调(p<0.05),NO的产量上升(p<0.05)；(4)HG+GLP-1+Wortmannin与HG+GLP-1相比,细胞早期凋亡率增加(p<0.05),p-AKt.p-eNOS蛋白的表达下调(p<0.05),NO水平下降(p<0.05)；(5)HG+GLP-1+L-NAME与HG+GLP一1相比,细胞早期凋亡率增加(p<0.05),NO水平下降(p<0.05),p-AKt蛋白的表达无明显变化。结论：GLP-1 (7-36)可改善高糖诱导的人脐静脉内皮细胞的凋亡,P13K/AKt/eNOS通路的上调可能参与了该抗凋亡作用。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
本文主要的英汉缩略词名对照表  8-10
第一章前言  10-12
第二章材料和方法  12-18
  2.1 材料  12-13
    2.1.1 实验细胞株  12
    2.1.2 试剂来源及配制  12-13
    2.1.3 主要仪器和设备  13
  2.2 实验方法  13-18
    2.2.1 细胞培养  13-14
    2.2.2 实验分组  14
    2.2.3 MTT检测细胞活力  14
    2.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡率  14-15
    2.2.5 一氧化氮浓度测定  15
    2.2.6 Western blot检测p-AKt和p-eNOS蛋白含量  15-17
    2.2.7 统计学处理  17-18
第三章结果  18-26
  3.1 HUVECs不同处理组干预不同时间后的MTT值检测结果  18-19
  3.2 流式细胞仪检测HUVECs各实验组细胞早期凋亡率结果  19-22
  3.3 各实验组细胞培养上清液一氧化氮浓度测定结果  22-23
  3.4 Western blot检测HUVECs各实验组p-AKt和p-eNOS蛋白含量结果  23-26
第四章讨论  26-30
第五章结论  30-31
参考文献  31-34
综述  34-44
  参考文献  40-44
致谢  44-45
攻读学位期间主要成果  45

GLP-1（7-36）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及作用机制

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