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中蜂囊状幼虫病毒辽宁毒株的结构蛋白鉴定及杆状病毒表达载体的构建

作　者: 程健
导　师: 张佩
学　校: 辽宁医学院
专　业: 免疫学
关键词: CSBV-LN 基因质谱杆状病毒转染昆虫细胞
分类号: S895.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 23次
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内容摘要

目的本研究通过对中蜂囊状幼虫病毒辽宁株(CSBV-LN)进行提纯,SDS-PAGE检测和质谱分析,对CSBV-LN结构蛋白进行了鉴定。在此基础上,构建VP1结构蛋白的杆状病毒表达载体,并筛选出能高效表达VP1蛋白重组杆状病毒,该研究为进一步研制中蜂囊状幼虫病的血清诊断试剂盒奠定基础。方法采用差速离心法对CSBV-LN进行提纯,对纯化后的CSBV-LN进行SDS-PAGE,分离到4个蛋白,对分离到的4个蛋白进行质谱分析,鉴定出VP1、VP3和VP0三个蛋白。然后,对其中VP1蛋白的基因,进行克隆,测序正确后,克隆至杆状病毒表达载体的pFastBacI的BamHⅠ和HindⅢ位点,构建VP1基因的杆状病毒重组表达载体VP1-pFastBacI。将VP1-pFastBacI在DH10Bac里面进行转座,形成重组VP1-Bacmid,将杆粒转染至sf9昆虫细胞,重组得到含有VP1基因的杆状病毒,进行连续传代,用电镜观察、PCR和Western-blotting等检测方法,对重组病毒进行鉴定。结果1、对CSBV-LN进行了提纯,得到了CSBV-LN的病毒原液。2、纯化后的CSBV-LN通过SDS-PAGE,分离到4个蛋白。对分离到的4个蛋白进行质谱分析,结果鉴定出VP1、VP3和VP0三个蛋白。3、构建CSBV-LN结构蛋白VP1杆状病毒表达载体VP1-pFastBacI,并在大肠杆菌DH10Bac里进行了转座,得到重组载体VP1-Bacmid。4、将构建出的重组载体VP1-Bacmid转染sf9昆虫细胞,收集病变细胞做Western-blotting检测,可检测出目的条带,大小约为31 KD。结论1、成功对CSBV-LN进行了提纯,得到了高纯度和高浓度的病毒原液。2、通过对CSBV-LN进行SDS-PAGE以及蛋白的质谱分析,鉴定出VP1、VP3和VP0三个蛋白。3、成功构建出CSBV-LN结构蛋白VP1杆状病毒表达载体VP1-pFastBacI。4、成功构建了VP1杆状病毒重组载体VP1-Bacmid,并实现了VP1在重组杆状病毒的表达,筛选到一株能够表达VP1基因的重组杆状病毒。

全文目录

摘要  4-6
英文摘要  6-8
英文缩略语表  8-9
前言  9-11
实验材料与方法  11-26
实验结果  26-34
讨论  34-40
结论  40-41
本研究创新性的自我评价  41-42
参考文献  42-45
综述  45-57
  参考文献  53-57
在学期间科研成绩  57-58
致谢  58-59
个人简介  59-60

中蜂囊状幼虫病毒辽宁毒株的结构蛋白鉴定及杆状病毒表达载体的构建

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